你是否正在准备做免疫组化或者对这一技术充满了好奇呢，你还在为免疫组化背景深、脱片等等这些问题而困扰吗？今天就和小海星来了解一下什么是免疫组化和那些免疫组化实验当中的小秘密吧。
什么是免疫组化
免疫组化是基于免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量研究。免疫组化具有特异性强、敏感性高、定位准确、形态与功能相结合等多种优点。免疫组化可应用于确定细胞类型、发现微小转移灶、了解分化程度、临床应用、肿瘤起源与分化、指导治疗与预后等多个方面。
根据抗原抗体反应和化学显色的原理，组织切片或细胞样本中的抗原先和一抗结合，再利用一抗与生物素、荧光素等标记的二抗反应，当抗原抗体复合物中荧光素受到激发光照射后会发出一定波长的荧光，从而可确定组织中某种抗原的定位，进而进行显色分析。
免疫组化三部曲
怎么选择抗体
抗体的选择是我们在做免疫组化过程中很重要的一个环节。其中，我们常用到的抗体包括单克隆抗体和多克隆抗体，多克隆抗体是指多株B细胞针对多个抗原决定簇产生的抗体，单克隆抗体则是针对某一抗原决定簇，由单株淋巴细胞所产生的抗体。多克隆抗体灵敏度较高，但抗体特异性较差，极易出现背景及非特异性染色。而单克隆抗体则拥有较强的特异性。
实验标本
免疫组化实验所用的标本分为组织和细胞标本，组织标本分别有石蜡切片和冰冻切片两种，冰冻切片可以保持组织抗原及活性完整，抗体结合效果好，但不足是组织结构及图片效果不佳；石蜡切片易于存放，图片效果较好且可以保持组织细胞的形态结构，但与冰冻切片相比其抗体结果效果略差。
常用方法
下面为您送上石蜡切片制作流程，请根据您的个人需求进行调整
石蜡切片的制作
①.固定：4%多聚甲醛
②.脱水：50%乙醇，70%乙醇1d，80%乙醇过夜，95%乙醇3h，无水乙醇2h
③.透明：50%二甲苯45min，%二甲苯30min
④.包埋：恒温箱内浸入石蜡45min
⑤.切片：5-7μm
⑥.贴片：温水中放置舒展
⑦.烤片：55°C过夜
我们还为大家整理了常见问题以及解决方法，若你还有脱片、背景深的实验问题，可以继续
转载请注明：http://www.0431gb208.com/sjszjzl/7316.html
