区别点
细胞凋亡
细胞坏死
起因
生理或病理性
病理性变化或剧烈损伤
范围
单个散在细胞
大片组织或成群细胞
细胞膜
保持完整，一直到形成凋亡小体
破损
染色质
凝聚在核膜下呈半月状
呈絮状
细胞器
无明显变化
肿胀、内质网崩解
细胞体积
固缩变小
肿胀变大
凋亡小体
有，被邻近细胞或巨噬细胞吞噬
无，细胞自溶，残余碎片被巨噬细胞吞噬
基因组DNA
有控降解，电泳图谱呈梯状
随机降解，电泳图谱呈涂抹状
蛋白质合成
有
无
调节过程
受基因调控
被动进行
炎症反应
无，不释放细胞内容物
有，释放内容物。
二、凋亡和坏死-形态学区别：三、Tunel法应用：Tunel是分子生物学与形态学相结合的研究方法，对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色，能准确地反应细胞凋亡典型的生物化学和形态特征，可用于石蜡包埋组织切片、冰冻组织切片、培养的细胞和从组织中分离的细胞的细胞形态测定，并可检测出极少量的凋亡细胞，因而在细胞凋亡的研究中被广泛采用。四、Tunel法详细的实验步骤：1.常规方法制作石蜡切片，用二甲苯浸洗2次，每次5min；2.用梯度乙醇(、95、90、80、70%)各浸洗1次，每次3min；3.PBS漂洗2次；用ProteinaseK工作液(20ug/ml)处理组织15-30min在21–37°C(温度、时间、浓度均需摸索)或者加细胞通透液8min；4.加入含2%过氧化氢的PBS，室温反应5min，PBS漂洗2次5.制备TUNEL反应混合液，处理组用50μlTdT+μl荧光素标记的dUTP液混匀；而阴性对照组仅加50μl荧光素标记的dUTP液，阳性对照组先加入μlDNase1，反应在15~25℃×10min，后面步骤同处理组。6.玻片干后，用滤纸小心吸去切片周围多余液体，加50μlTUNEL反应混合液(阴性对照组仅加50μl荧光素标记的dUTP液)于标本上，加盖玻片或封口膜在暗湿盒中反应37℃×1h。7.加入到已预热37℃的洗涤与终止反应缓冲液，37℃保温30min，PBS漂洗3次；8.可以加1滴PBS在荧光显微镜下计数凋亡细胞(激发光波长为~nm，检测波长为~nm)；9.玻片干后加50μlDIG-POD于标本上，加盖玻片或封口膜在暗湿盒中反应37℃×30min。10.PBS漂洗3次；在组织处加50~μlDAB底物，反应15~25℃×10min；11.PBS漂洗3次；拍照后再用苏木素或甲基绿复染，几秒后立即用自来水冲洗。梯度酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封片。12.加一滴PBS或甘油在视野下，用光学显微镜观察凋亡细胞(共计~个细胞)并拍照。可结合凋亡细胞形态特征来综合判断(未染色细胞变小，胞膜完整但出现发泡现象，晚期出现凋亡小体，贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落；而染色细胞呈现染色质浓缩、边缘化，核膜裂解，染色质分割成块状/凋亡小体)。五、注意事项：(1)出现非特异性荧光标记：组织或细胞未充分固定；使用了不适当的固定液；TUNEL反应时间过长，或反应液渗漏。(2)荧光背景高：支原体污染片；细胞核中的DNA断裂；TUNEL反应过强；红细胞中血红蛋白导致的自发荧光产生严重干扰。(3)标记效率低：使用甲醇或乙醇固定；固定时间过长；未避光操作。六、原位末端凋亡检测(Tunel)技术服务：科沿有道提供各类组织样品的组织切片凋亡检测服务，只需要您提供相应的组织样品，我们将为您提供详细的试验流程报告、实验图片、实验数据，并返还相应的实验材料(蜡块、切片等)。七、结果示例：北京科沿有道生物科技有限公司，专注于生命科学最前沿科研技术服务，具有较好的生物学和医学技术服务平台，能够提供实验课题设计、论文编辑润色，以及细胞实验、动物模型、病理检测、分子实验、免疫检测、病毒包装、组学服务、基因编辑等整体课题一站式服务。科沿有道秉承“客户为先，服务至上”的经营理念，以一切为了客户的利益为宗旨，努力为广大客户提供最优质、高效的服务，科沿有道人用实实在在的优质实验技术换取客户的信任，相信在未来的工作中，科沿有道人一定能够成为您的得力助手和值得信赖的合作伙伴。预览时标签不可点收录于合集#个上一篇下一篇