组织的切片质量好坏、是否利于切片,完全依赖于组织处理的每一个步骤,而每一个步骤的质量又与前一个步骤密切有关。一般要先取材→固定→透明→包埋→切片,最后进行染色组化等操作。最容易毁坏组织切片的步骤是不合适的组织包埋,即组织不合适的摆放和不合适的排列方向。
动物组织片包埋可分为OCT包埋(冰冻切片)与石蜡包埋。将组织块放入盛有蜡液的模具中,所需组织切面与底部平行,因蜡液在冷环境中易凝固,此步尽量要快。包埋用的石蜡因为要用于切片,对其质量和纯度和硬度的要求比较高,一般采用徕卡高熔点58-60℃的片状石蜡。
石蜡包埋是一种常规包埋法,其独特优点是能切出极薄的蜡片(2~10μm),所制作的切片能连成蜡带,便于制作连续切片,而且操作较容易,组织块可以包埋在石蜡中长期保存。
包埋操作时具体的注意事项:
1用塑料包埋盒包埋组织时,应注意待包埋模型底部石蜡开始凝固后,盖上包埋盒,待其四周凝固后,进行二次加蜡。这样做的目的是使包埋盒与组织蜡块接触更加稳固,减少和防止切片时产生振颤或包埋盒与组织蜡块脱落。
皮肤组织切片2包埋时组织要尽量平整
3取出包埋盒内的组织,校对正确后用干净的热镊子将所有组织悉数放入模型的底部,待组织与模型内的蜡液充分融合后,按要求排列后迅速移动模型至冷台,底部石蜡刚开始凝固,用镊子轻压组织数秒,待组织埋平后,迅速盖上包埋盒注上蜡液,10~15s后等包埋盒与模型周边的蜡液凝固时,再次补充注入少许蜡液,以增加包埋盒的稳固性
4包埋模具中的石蜡不要灌注过满,以塑料盒的1/3
5包埋用石蜡必须定期过滤,蜡温应控制在62℃左右。
6组织包埋完成后必须进行清点蜡块数量,以防组织块在脱水、包埋过程中遗失.
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