石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片都是在石蜡切片的基础上发展起来的。苏木精与伊红对比染色法（简称HE染色）是石蜡切片最常用的染色方法。该方法适用范围广泛，对组织细胞的各种成分都可着色，便于全面观察组织构造，染色后不易褪色可长期保存。经HE染色，细胞核被苏木精染成蓝紫色，细胞质被伊红染成粉红色。如图1所示。
图1组织切片：细胞核被苏木精染成蓝紫色，细胞质被伊红染成粉红色
石蜡切片也是研究植物细胞形态结构常用的制片方法。番红——固绿对染法，为植物切片上最普遍的染色方法。番红为碱性，能使细胞核及木质化的细胞壁染成红色；固绿为酸性，能使细胞质及纤维素染成绿色。
石蜡切片实验步骤
一、取材
剪取组织切块，以5mm*5mm*2mm或10mm*10mm*2mm为宜。
二、固定
将组织切块用生理盐水冲洗，投入固定液中固定。
三、脱水
70%、80%、90%各级乙醇溶液中脱水各40min,放入95%、%各两次，每次20min。
组织经固定和洗涤之后，含有大量水分，水与石蜡不能互溶，所以必须将组织中的水分出去。
四、透明
纯酒精、二甲苯等量混合液15min，二甲苯30min，直至组织透明为止。
由于乙醇与石蜡不相溶，而二甲苯既能溶于乙醇又能溶于石蜡，所以脱水后需用二甲苯以过渡。当组织全部被二甲苯中有时，光线可以透过，组织呈现不同程度的透明状态。
五、透蜡
放入二甲苯和石蜡各半的混合液15min,再放入石蜡I、石蜡II各30min。透蜡的目的是除去组织中的透明剂（二甲苯），使石蜡浸透到组织内部达到饱和程度以便包埋。
六、包埋
将透蜡的组织连同熔化的石蜡倒入包埋盒内，使其立刻降温凝固成蜡块。
七、切片
八、贴片
1、取洁净载玻片，滴一滴粘片剂于玻片中央，涂开。
2、滴1滴蒸馏水于粘片剂上。
3、用小镊子夹取蜡带放在蒸馏水上。
4、摆好玻片位置，在酒精灯上方适度加热，使蜡片展开
5、展片后，把载玻片置于恒温箱内烘干，一昼夜干燥后取出染色。
九、脱蜡复水
石蜡切片经二甲苯I、II脱蜡，然后放入%、95%、90%、80%、70%等各级酒精溶液中各5min,再放入蒸馏水中3min。
染色液多为水溶液，因此，染色前必须将蜡脱去，使切片中的材料由有机相进入到水相。
十、染色
切片放入苏木精中染色约10~30min。漂洗后用伊红复染。
十一、中性树胶封存
切片经染色、脱水、透明后，即可用封藏剂将其封藏起来，目的是永久保存切片，便于镜检。常用的封藏剂为中性树胶。
冰冻切片
原理：冰冻切片是借助低温使组织冻结达到一定的硬度并通过冰起支撑作用来进行切片的一种方法。速冻可减小冰晶直径，避免组织细胞损伤。
应用领域：临床手术的快速病理诊断。冰冻切片技术在临床上主要用于某些疾病在术前无法通过活检确定病变性质，而只能通过在术中切取病变组织，经病理诊断来确定治疗方案。其次是一些特殊检查需要保持组织的抗原性或酶的活性不被破坏时，也需采用冰冻切片技术。例如，脂肪染色、肾穿刺活检的免疫荧光标记、酶组织化学及特殊抗原的免疫组化检查等。
实验步骤：
1、取材：不能太大太厚，厚者冰冻费时，大者难以切完整。
2、冷冻以及切片：切片厚度一般在5—10μm.视不同的组织选择不同的冷冻温度，切未经固定的脑组织、肝组织以及淋巴结时温度不能调太低，在-10℃—-15℃；切甲状腺、脾、肾、肌肉组织时，可调在-15℃—-20℃；切带脂肪的组织时，应调至-25℃；切含大量脂肪时，应调至-30℃。
3、贴片及染色：冰冻切片附贴于载玻片后，立即放入恒冷箱内固定液中固定1min后即可染色观察.
4、脱水，透明，中性树脂封片。
步骤1—4只需花费不到15min即可完成.冰冻切片的制作原则与石蜡切片不同，制作一张高质量的冰冻切片需要组织速冻完全，防止冰晶产生，所以切片染色的各个环节均需要注意。但冰冻切片步骤简洁，耗时远远小于石蜡切片，临床手术中便于快速病理诊断。
图2NikonNi正置显微镜40×物镜下静动脉血管横切
石蜡切片与冰冻切片的比较
1、能做冷冻切片的不一定能做石蜡切片，因为石蜡切片需要高温烤片，可能会破坏组织的抗原性，如果组织的抗原性较稳定，则可做石蜡切片；但是要求做石蜡切片的，可作冰冻切片。
2、冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性，做免疫荧光时不需抗原修复这一步。缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构，可能会使抗原弥散；切片厚度较石蜡的厚，做的片子没石蜡的漂亮。
3、石蜡切片的优点可以保持组织细胞的形态结构，且容易存放在室温，而冰冻切片比较麻烦，一定要存在-80℃的低温冰箱中。由于石蜡切片可以切刀4um左右，抗体容易渗透到组织中去，而且得到的颜色/形态都较冰冻切片好。
上海千欣仪器有限公司是二〇〇一年成立的一家专业显微系统销售公司，公司总部设在中国经济中心上海市徐汇区。成立至今，一直专注于光生物、光物理、光化学行业及相关实验室仪器的应用与开发。在生命科学、医疗、卫生、材料科学等诸多领域积累了丰富的专业应用及服务经验。
预览时标签不可点收录于话题#个上一篇下一篇转载请注明：http://www.0431gb208.com/sjszjzl/184.html
