免疫组织化学（IHC）以获得特异性组织靶标信号的清晰成像为目标。标记抗体用于原位结合特异性靶抗原，根据高质量的染色结果，细胞和靶标组分便可以清晰观察到。IHC实验可以提供准确的数据，揭示抗原表达的分布情况，数量和强度。
免疫组化成功技巧
1.选择正确的抗体
查看所使用抗体的已验证实验类型。最佳情况下，应选择经过IHC验证的抗体，需要确定产品是否在石蜡（IHC-P）或冰冻切片（IHP-Fr）中进行了验证。根据免疫原序列的同源性，可以预测抗体是否可以在不同物种中反应。一旦选定抗体，需要测试不同浓度的抗体以确定实验中最合适的抗体浓度。同时抗体稀释液的选择也会影响抗体的性能。
2.准备样本组织
组织可以通过固定在福尔马林中，然后石蜡包埋制备成石蜡切片或者冷冻包埋制备成冰冻切片。选择石蜡切片（IHC-P）或冰冻切片（IHC-Fr）的方法都有相应的优点和缺点，可以根据组织和抗原表达具体情况选择。
3.对照
设置对照可以获得更加严谨的研究结果，并且有助于在实验结果不理想的情况下查找原因排除故障。4.抗原修复
抗原修复是获得高质量染色的重中之重。组织需要通过加热或酶处理，以使抗体与抗原结合，不同的抗原修复方法适用于不同样本。例如，使用热处理进行抗原修复可能会对组织造成人为改变，因此应该设置相应的对照。组织固定过程会导致抗原决定簇发生交联，而阻止抗原抗体结合，使用酸性缓冲溶液进行热处理，可以使抗原决定簇重新暴露，并保持目标抗原的完整性而不影响与抗体结合。
5.封闭
传统的免疫组化方法容易受到内源性过氧化物酶和生物素的干扰，导致假阳性结果。必须对其进行灭活和封闭。
此外，Fc受体等可以引起抗体的非特异性结合。推荐选择与二抗相同种类的血清进行非特异封闭，或者使用IHC背景阻挡器，可以减少背景信号。延长封闭时间也可以有效地减少非特异性结合。
6.显色
IHC最常用的显色检测方法是链霉亲和素-生物素。检测背景的深浅以及特异性染色的深浅基本上都以DAB孵育条件决定。DAB的显色时间并不是固定的，主要是使用显微镜控制显色时间，当出现特异性染色较强且背景着色较浅时即可冲洗。如果DAB显色时间过长（超过十分钟）才出现阳性染色，可能是一抗体浓度过低或者封闭时间过长。如果DAB显色时间过短颜色就很深，可能是一抗过高，需要下调抗体浓度。除了信号染色，核复染可以增加结果对比度和定位视角的观察。
*ProLong?GoldAntifadeReagent具有很强的抗光褪色能力，该试剂处理24小时以内，封片后样品可保存数月。兼容多数染料，适用于多色标记检测。
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