动脉粥样硬化是目前心血管常见疾病，治疗方法一般是冠状动脉介入治疗。但是介入手术后通常会出现血管内膜损伤再狭窄症状，继而引发内皮细胞功能紊乱、血管平滑肌细胞增殖、迁移、炎症反应，最终可能引起病理性内膜增生。广大科研工作者为了探索血管内膜损伤以及狭窄的机制，可以建立大鼠颈总动脉损伤/狭窄模型，探索相关信号通路和分子机制，下面为大家介绍一下常模大鼠建模方法以及可能的机制探索方案，以供大家参考。
1.动物：Wistar大鼠，SPF级别雄性，8-10周龄。
2.实验药品和术前准备器械：碘伏消毒液、酒精棉球、6%水合氯醛、4%多聚甲醛、青霉素注射剂、手术显微镜、医用缝合针、医用缝合线、球囊扩张导管
3.手术：
（1）麻醉：按照大鼠重量5mg/kg计算6%水合氯醛注射量，麻醉后将大鼠腹部朝上固定板上；
（2）备皮：粗剪刀剪去大鼠颈部被毛，碘酒消毒；
（3）暴露颈外动脉：手术显微镜下沿颈正中线剪开大鼠皮肤，沿颈正中线钝性分离浅筋膜等，暴漏颈总动脉，沿着颈总动脉方向分离寻找，可以看到颈外动脉；
（4）插入球囊导管，损伤血管内膜：结扎颈内动脉和颈外动脉远心端，用动脉夹将颈总动脉夹闭，在显微镜下尽量在靠近颈外动脉结扎处血管上剪开一个小口，注意长度不能太长，将球囊导管插入开口处，缓慢转动球囊直到动脉夹处，松开动脉夹，将压力泵充气，阻断血流30s后，将球囊在颈总动脉中来回抽动8-10次，磨损血管内膜，抽出球囊后结扎颈外动脉近心端；
（5）松开颈内动脉结扎处，确定无血后用青霉素溶液清洗伤口，缝合肌肉和皮肤，术后连续注射三天青霉素防止感染；
常规上述造模方法结束后，大鼠颈动脉血管的损伤/狭窄模型即完成，小鼠也可以按上述方法进行，正常饲养可以存活很久。动物模型建立好以后，对后续机制研究，药物治疗效果等均可按下列方式进行。
4.实验分组
（1）假手术组：不进行球囊导管插入，其他操作一样；
（2）造模组：按上述步骤进行大鼠颈动脉血管损伤/狭窄模型；
（3）造模组+治疗组：按上述步骤进行大鼠颈动脉血管损伤/狭窄模型，模型建立后对动物进行某药物的灌胃，连续灌胃28d；
（4）造模组+A基因抑制剂/激动剂干预组：按上述步骤进行大鼠颈动脉血管损伤/狭窄模型，模型建立后对动物进行A基因A基因抑制剂/激动剂的灌胃，连续灌胃28d；
（5）造模组+A基因腺相关病毒注射组：按上述步骤进行大鼠颈动脉血管损伤/狭窄模型，模型建立后对动物进行A基因腺相关病毒注射，每2周注射1次，总共注射2次；
5.上述动物造模后28d，处死取材
（1）颈总动脉段：损伤处血管取材后，一分为二，分别4%多聚甲醛固定和-80℃冻存；
（2）血清：眼眶取血，分离血清后-80℃冻存；
6.检测
（1）HE染色：针对血管损伤处，通过石蜡包埋切片，进行HE染色，拍照，观察损伤处血管组织形态变化以及内膜增生情况；
（2）免疫组化：针对血管损伤以及狭窄相关的关键基因，进行免疫组化染色，判断在正常血管和损伤血管处关键基因的表达情况，以及和A基因的关联；
（3）荧光定量PCR和WB检测：针对上述疾病模型的可能相关调控基因，进行受损伤处血管样本的RNA和蛋白表达量检测，判断相关信号通路在上述疾病模型中的作用。
（4）ELISA检测：血清样本中检测炎症相关指标，例如：IL-6、TNF、TGF等。
7.案例展示
造模后各组动物血管HE结果图
免疫组化染色显示颈动脉血管处蛋白表达8.引用文献
[1]唐良虎.Calpastatin/Calpain系统通过MMP2/TGF-β1通路改善血管再狭窄[D].西南医科大学
[2]段硕.大鼠主动脉内皮球囊损伤后Jagged1、Notch1的表达变化及缬沙坦对其变化的影响[D].青岛大学,.
[3]段硕.大鼠主动脉内皮球囊损伤后Jagged1、Notch1的表达变化及缬沙坦对其变化的影响[D].青岛大学,.
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