实验方法1实验分组将实验动物标号后，按照随机数字法分为实验组、对照组、空白组，每组3只，标准条件下适应性饲养1周。
2实验造模所有动物术前2h禁食。腹腔注射1%戊巴比妥钠40mg/kg麻醉大鼠。实验组大鼠摆放至俯卧位，进行尾椎X射线检查，先在X射线辅助下借助注射针头定位Co6/7椎间盘，X射线正位参数为80kV、ms，X射线侧位参数为kV、ms，在拟进针处进行表皮标记，最后在表皮标记处进行垂直穿刺，穿刺至4mm后，将注射器针头水平旋转°，留针30s后均匀缓慢注入无水乙醇40μL，出针，见图1，2；对照组大鼠手动定位Co6/7椎间盘，做好表皮处标记，固定大鼠尾巴，消毒，手术刀纵向切开尾部标记部位皮肤，用镊子、组织剪分离皮下结缔组织和肌肉组织，予止血钳固定，暴露术野；用注射器针头对Co6/7椎间盘进行垂直穿刺，穿刺至4mm后，将注射器针头水平旋转°，留针30s后均匀缓慢注入无水乙醇40μL，出针，见图3。操作完成后缝合伤口[10]。空白组大鼠不进行任何操作。
3术后处理造模后继续按照标准饲养条件下饲养，笼内自由活动，正常饮食，连续3d伤口换药及涂抹多西环素5g抗感染，密切观察伤口情况。
4主要观察指标
影像学检查术后1周，麻醉下每组选取3只大鼠行MRI检查，在MRIT2图像上观察大鼠椎间盘退变情况，观察其信号强弱，以及纤维环与终板两者的界限。MAGNETOMSkyra3.0T超导MRI成像系统的T2加权像参数参数设计，TR：ms，TE：ms，FOV：80mm，Thickness：1.5mm。根据改良的4级Thompson系统分级[11]：1级，正常；2级，信号轻度下降；3级，信号中度降低；4级，信号显著减少。级别越高退变越明显。
组织病理学检查处死结束影像学检查后的大鼠，尽量完整截取其Co6/7椎间盘组织，用无菌生理盐水清洗表面血迹，然后放入固定液中固定24h以上；将组织从固定液取出，在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整，水洗20min后，进行脱水透明浸蜡；将浸好蜡的组织于包埋机内进行包埋，将蜡块置于石蜡切片机以4μm厚度进行切片，制成石蜡切片。选取以上石蜡切片进行脱蜡至水，再使用苏木精染色液(Harris)染色3-5min，自来水洗一两分钟，之后入伊红染液(醇溶性)染一两秒，不需水洗，直接浸入体积分数95%乙醇，无水乙醇中脱水一两分钟，封固成片，置于光镜下观察椎间盘形态变化。
信息来源：中国组织工程研究,,26(35):-.
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