年HalsteddeRiemer首创冷冻切片技术，年LouisBWilson在MayoClinic成功地完成了第一例冷冻切片诊断，距今已有多年的历史。年，ArchPatholLabMed发表的纪念冷冻切片周年的文章中提到随着科学技术的发展，新型冷冻切片机不断问世，冷冻切片已成为一种不可或缺的研究手段。作为组织实验中最常用的两种切片方法，冷冻切片石蜡切片和各有优缺点。
图1.切片方法
表1.石蜡切片与冷冻切片对比
冷冻切片（frozensection）
冷冻切片是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，多应用于手术中的快速病理诊断。
原理
被冷冻时，组织中的水变成冰而使组织变得坚硬，其硬度可通过改变温度加以调节。降温会使组织块更加坚硬，反之，提高温度则可使组织变软。大多数非脂肪不固定组织切片时最好控制在在-20～-25℃。
制备方法-取材要点
01标本必须新鲜无固定，无液体浸泡，组织块大小厚薄适宜。
02选择好组织切面，保持组织的清洁。03组织块勿受挤压，尽量保持组织的原有形态。
04切除不需要的部分，遇有脂肪组织要剔除。
05组织内有异物一定要清除。
制备方法-温度设置
表2.各种组织冷冻温度控制
制备方法-具体步骤
01冷冻前将恒温冷冻切片机的速冻头温度和箱内温度调整到适宜的切片温度。
02在标本托上涂一层冷冻包埋剂—OCT，然后将取材后的新鲜标本安放在标本冷冻托上并用OCT包埋剂覆盖标本。03组织较小或较薄，可先将OCT滴加在标本托上，冻一个小冷台，将组织放在制成小冷台上，再覆盖OCT冷冻并用冷冻锤轻轻压平。
04标本冷冻完成后将标本托固定再切片机的机头上，调整机头位置使其恰好位于切片刀的后方。
05以粗切削的方式进行标本的粗切削至暴露标本的最大平面，使用连续转动方式削5－6个切面后，用毛笔清除机头、标本托及切片刀上的组织碎屑。
06确认切片厚度，一般6μm－10μm不等，根据组织的不同可适当调整切片的厚薄度。
07放下防卷板以转动大轮推进的方式进行切片，好的切片将在防卷板下方形成一张完整平坦无褶的薄片。
08打开防卷板，用载玻片平稳地轻压组织，使其平整地吸附到载玻片上（载玻片要保存在室温条件下）。
染色效果图
注意事项
01切片前组织不能经任何固定剂浸泡，也不能接触水分，应保持干净，可以用滤纸把组织表面的水分印干，最大限度地防止切片产生冰晶。
02一次性刀片，要保存在冰冻室内，便于换刀片时，不至于因刀片温度过高，一时又难以很快降温，而影响制片，在准备进行切片前可提前安装好刀片使之降温。03已知具有传染性的标本（例如结核病、病毒性肝炎、艾滋病等），不适宜做冰冻切片，以免影响操作人员健康，冰冻切片结束后，除机器本身自带消毒设备外，也可采用紫外线照射的方法。
04防卷板及切片刀和持刀架上的板块要保持干净，需经常用毛笔扫除切片残余和用柔软的纸张擦，有时需要每切完一张切片后就用纸擦一次，因为这个地方是切片通过和附贴的地方，如果有残余的包埋剂粘于刀和板上，将会破坏甚至撕裂切片，使切片不能完整切出。
经验分享
01用于附贴组织片的载玻片，应放在常温的地方，不可放在冷冻室中，这样可以保持冰冻组织片与载玻片有一较大的温差，利于切片的附贴，减少掉片的概率。
02利用切片机的防卷板，切制组织片，调好防卷板。制作冰冻切片，关键在于防卷板的调节上，这就要求操作者要细心，准确地将其调校好，调校至适当的位置，切片时切出的组织片能在第一时间顺利通过防卷板的通道，平整的铺在持刀器的金属板上，掀开防卷板，用载玻片粘取组织片。03采用直接切片的方法，此时当转动切片机切下一片组织时，不要完全切断，让该片组织片停留在冻块上，这片组织会形成卷曲，可用细毛笔轻轻将卷着的组织片刷平，再用玻片粘贴组织片。
04多例多块组织同时做冰冻切片时，应各自放置在不同的支撑器上，放于冷台进行冷冻处理，然后依据不同的编号，依次进行切片。
参考文献
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