前言：
上一期咱们讲了细胞免疫荧光的一些知识，今天这期咱们来讲一讲石蜡切片免疫荧光的一些操作以及注意事项。这期讲的是传统的同源双标和异源双标，以后专门有一期TSA多标技术。1.图片展示照例，咱们先来看几张发表文章的荧光图；我在查找的过程中发现，石蜡切片免疫荧光文章的分数普遍没有细胞免疫荧光的高，这是为什么嘞？所有图片来源于pubmed，图片按照影响因子从低到高排列。PMID：影响因子：6.PMID：影响因子：11.PMID：影响因子：14..具体操作石蜡切片相较于细胞荧光来说，操作要求低一些，成本略低一些；蜡块方便长距离运送。●原理原理跟前面讲的一样，一抗和样本蛋白结合，带荧光标记的二抗和一抗结合，最后激发荧光染料发光。今天着重讲一下同源双标和异源双标的区别。这里的源指的是一抗的来源，是兔抗、鼠抗还是其他的什么来源。同源和异源都能做出来双标三色，区别在于实验步骤上，简单的当然是异源双标。异源双标在加一抗时可以同时加两种一抗，同源双标则需要加完一种一抗后，加这种一抗对应的二抗，然后高温修复，重新打开抗原结合位点，再加第二种一抗和对应二抗。至于为什么这样做是因为：异源由于抗体结构不同，各自结合各自的互不影响。同源如果同时加，因为两种一抗IgG相同，二抗同时与两种一抗结合，没法区分颜色。●步骤（为图片，保存看更清晰）●注意事项封闭液尽量选择与二抗种属同源的血清封闭液,并且二抗采用一样的种属来源，这样可以一种来源的血清完成两个抗体的封闭；
一抗孵育推荐4°过夜，着急也可以37°一小时；
如果想要抗体回收再利用，异源也只能一个一个的加了；
为了防止一抗、二抗等试剂残留而引起非特异性染色，所以适当地加强清洗（延长时间或增多次数）；
封片注意避免产生气泡：方法是直接在载玻片组织上滴一滴封片液，然后一手拿住盖片某一角，接近封片液近端的角先降低，直至接触到液体时为止；当发现液体接触面在不断弥散时，则可以缓慢降低手持角，这样一般不会产生气泡；
以上就是小诺关于石蜡切片双标的一些经验分享，欢迎加下图转载请注明：http://www.0431gb208.com/sjszlfa/576.html
