拉曼光谱是一种无损、无标记、非接触式的“指纹图谱”分析检测技术，可以为生命科学/医学研究领域的样品提供丰富的分子层面的信息。生命科学/医学研究样品有许多不同的处理和保存方法，本系列教程将介绍如何对生命科学/医学研究样品进行处理及不同处理方法如何进行拉曼测试准备。
石蜡包埋组织切片制样
取材
取新鲜组织，用刀片单向切割至所需大小
固定
将切好的组织置于4%的多聚甲醛（4%PFA）中在4℃条件下固定24h以上；
对于水分多的组织，中间应更换1~2次新固定液。
洗涤
将组织从固定液中取出，立即用去离子水对组织进行反复清洗，确保组织内固定液及结晶沉淀被清洗干净
将清洗好的组织平整地置于脱水盒内。
脱水
将脱水盒装入脱水篮置于脱水机内进行梯度酒精脱水：
纯酒精为无水乙醇；
对于较小的组织，为防止脱水皱缩，可从30%酒精开始梯度脱水。每个梯度脱水时间可根据组织大小调整。
透明
以二甲苯替换出组织中的酒精，便于后续浸蜡包埋。
逐级置换：
二甲苯I5-10min→二甲苯II5-10min→二甲苯III5-10min→二甲苯IV5-10min。
浸蜡
将组织留在透明剂内，在透明剂上轻轻倒上一层已融化的石蜡，体积比约3:2；
随后将组织置于35-37℃熔蜡炉内，至石蜡凝固；
将整体移入56-60℃恒温箱中停留2-5h，待石蜡彻底融化；
换2-3次新鲜纯石蜡，将组织内的透明剂全部排除。
包埋
按包埋面要求将组织块放入盛有蜡液的包埋框内，并贴上对应的标签。
于-20℃冷冻台/冰箱进行冷却，石蜡凝固后取出包埋蜡块并进行修整。
切片
将修整好的蜡块置于石蜡切片机上进行切片，按照需求切不同厚度样品。
切片漂浮于摊片机的40℃温水上并将组织展平，用洁净载玻片将已展开的组织捞起，使其位于载玻片中央，放入60℃烘箱内烤片48h。
待水烤干、蜡烤化后取出常温备存。
脱蜡复水
准备：将组织切片在室温放置1h或60℃恒温箱20min；
脱蜡复水：
按如下步骤进行脱蜡复水
拉曼测试
脱蜡复水后的切片室温干燥后即可进行拉曼光谱及成像测量
石蜡包埋组织切片拉曼分析实例
动脉粥样硬化斑块中平滑肌细的免疫检测：免疫荧光（A、B）和免疫SERS（C、D）成像。A:平滑肌肌动蛋白（红色)、细胞核（蓝色）、弹性纤维（绿色）、剩余血管区域（深绿色）；B：平滑肌肌动蛋白；C：平滑肌肌动蛋白免疫SERS分布（以4-NTB位于cm-1处峰为标记成像，4-NTB可与抗平滑肌肌动蛋白结合）；D：平滑肌细胞免疫SERS聚类分析结果；参考文献：
DOI：10./j.bios..02.
生命科学样品拉曼测试解决方案
“德国WITecalpha系列显微共聚焦拉曼光谱仪优异的共聚焦性能、超高的空间分辨率、超快的成像速度大大节约了研究时间，缩短了研究周期。”
致谢
感谢中国科学院生态环境研究中心、长春应化所各位老师同学的大力支持与帮助！感谢上海氘峰医疗科技有限公司的大力支持与帮助！版权
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