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衡道不同细胞量蜡块的样本制备方法

来源:石蜡 时间:2022/7/16

细胞诊断学在病理具备不成或缺的代价。此篇文件编译是相干模范制备法子的一个小集成。

藉由制做合适高品质细胞蜡块赢得充裕的细胞模范,不单也许施行细胞学诊断,还能用来施行更多的襄理性钻研,如免疫结构化学染色,原位荧光杂交和其余分子钻研等,协助对病变施行明白分类与断定调节计划。

与保守手术赢得的样事实比,细胞技能所需花费相对省钱,且侵占性较小。细胞蜡块也许永远贮存,同时容许保存原始涂片。别的一个便宜是,新兴微波管教技能可运用于袖珍活体结构和细胞蜡块,从而减少紧张模范的制备光阴,抬高汇报时效。

Varghese等人在当代病理学杂志上发布了一项考证钻研,剖析比对了细胞蜡块与外科手术蜡块染色样式的免疫结构化学结束。该钻研行使了41个模范并附加合适对比,共比对了个染色项方针次染色,结束讲明一致率为95.7%。

关于从细胞蜡块中赢得的结构与来自响应手术模范的结构,实习室也许行使不同的细胞块制备法子,从所谓「穷汉的法子」的低技能蒸汽不变法子到高科技的Cellient主动化细胞蜡块制做系统等。本文刻画了几种细胞蜡块的制备法子。

需求解说的是:

1、当实习室计划采取哪类法子时,必需兼顾思索制备和劳动过程及实习室资本、模范量、模范类别等。

2、不同的细胞蜡块制备行使不同的教育基来洗濯、输送和不变模范。中性缓冲福尔马林被觉得是广泛的不变剂。其余不变剂囊括福尔马林/95%乙醇洗濯液液和Nathan酒精福尔马林取代品(9份%乙醇/1份40%甲醛),被觉得是一种毒性较小不变剂。甲醇则做为主动Cellient细胞蜡块技能不变剂。很多襄理测试平台行使福尔马林不变白腊包埋的结构施行考证。

3、由于抗原性改观,非福尔马林不变法子或者涌现假阴性免疫细胞化学染色结束,实习室需求对行使酒精和福尔马林不变的细胞蜡块施行免疫细胞化学和分子技能考证。

01

凝块和刮擦法子:

也许藉由细针抽吸方法汲取模范置于载玻片上以赢得细胞蜡块。此方法易使样本干枯/凝聚;将材料从载玻片上刮下并用拭镜纸包裹,置于包埋盒中,参预中性缓冲福尔马林后于病理学实习室施行结构管教。

02

BBC细胞块不变法子

行使细针抽取1mlBBC细胞蜡块不变液洗濯非涂层试管样本,将试管颠倒在合适的滤纸上,待流体排出后,将纸张刮掉一个小地域。而后于结构病理学实习室中施行通例模范管教。

03

血浆凝血酶细胞块制备

这是最罕用的细胞蜡块制做法子。经过增加离心细胞悬浮积淀物制备细胞蜡块。将细胞物资浸入血浆和凝血酶凝块中(图1)。将20ml样本参预到falcon管中,并以rpm离心10分钟。离心后,去除上清液。积淀物中参预0.5ml血浆和两滴3%曙红水溶液并震撼混杂。接下来,增加0.25-0.5ml从新构成的凝血酶,并马上搅拌溶液,凝块将在30-60秒内孕育。将凝块置于含有福尔马林的包埋盒中。而后在结构病理学实习室中施行通例管教模范。

图1.血浆凝血酶细胞块制备

04

火棉胶袋细胞蜡块制做程序

该法子将合适细胞液在火棉胶袋中施行更充足的细胞蜡块制备(图2和3)。

火棉胶袋管的制备:将适当火胶棉试剂倒入15毫升玻璃管,让火棉胶在管中安放10-15分钟,将火棉胶倒回试剂瓶中,倾倒时震撼管子,将试管颠倒在试管架中,使其维持约30分钟直至干枯。干枯后,用蒸馏水填充管子。假如袋子不敷干枯,管子看起来不透亮,袋子即不能行使,理当丢弃,在行使前往除蒸馏水。火棉胶袋可寄存长达一周。

火棉胶袋中细胞蜡块的制备:行使分注器将模范移到火棉布袋中。将火棉胶袋试管rpm离心10分钟。严慎吸去上清液。行使镊子,将胶棉袋的边际安装在管子的唇缘。行使镊子将袋子从管子中掏出,而后在颗粒上方系上棉线,用铰剪剪掉有余的胶棉袋和绳索,将残余的袋子放入结构包埋盒中,并将包埋盒子放入装有10%中性缓冲福尔马林的样本杯中,施行结构病理实习室通例管教模范。

图2.火棉胶袋细胞蜡块制做

图3.火棉胶袋细胞蜡块制做

05

ShandonCytoblock法子

该技能是藉由手动制备细胞蜡块产物,行使带有包埋盒和试剂的试剂盒,将包埋盒置于中性缓冲福尔马林中施行结构病理实习室通例模范管教,通精密胞离心术浓缩细胞而制成。

该技能代替了耗时且昂贵的琼脂和凝血酶技能,而且需求无磷不变剂,譬喻ZincFormal-Fixx,Formal-Fixx或Glyo-Fixx(福尔马林取代品),或省略马林不变环节在管教机上管教的模范。也也许在马上活检程序上职掌。

06

Cellient主动细胞块系统

该技能每每行使于小的结构碎片及液基抹片刻,它是第一个全主动细胞蜡块创造系统(图4)。将60ml样本置于小瓶中以rpm离心5分钟,将样本回旋离心后,倒出上清液。只要将三滴细胞积淀物增加到PreservCyt样本瓶中不变,将含有样本的小瓶放入Cellient主动化细胞蜡块系统便可制成。均匀功课光阴为45分钟。

图4.Cellient主动细胞块系统

07

HistoGel法子

该技能优先用于独自分布的细胞学模范,该计划囊括浓缩细胞环节且恣意切取细胞蜡块表面。该技能可罕用于宫颈ThinPreps细胞蜡块制备,且易博得散开的反常私人细胞。

将样本以rpm离心5分钟,倒出上清液,积淀物留在管中,HistoGel(HG)经过在微波以中等功率凝聚5至15秒而液化,充裕的HG来遮盖堆积物(约0.5ml)并与积淀物混杂使HG固化(室温下2到3分钟或行使冷却块时更快),由管壁参预10%中性福尔马林剂将固化的HG积淀物从管底部移出,并置于包埋盒的滤纸中施行结构病理学实习室通例管教模范,切取白腊块时应严慎,因结构碎片或者正幸而蜡块表面。

08

结构凝聚物凝块法

该法子在细针抽吸针顶端的内腔孕育凝块。而后将凝块直接转变到福尔马林中施行不变,云云可防备诊断模范遗失。行使结构凝块法制备细胞蜡块,行使21号/22号抽血空针,抽取模范,而不是行使打针器将材料排到盐水中制备蜡块。

当模范离开针尖时,将其搜集到预切片的滤纸上,针尖以圆周疏通方法带领孕育锥形结构和血液混杂物凝聚。将凝块在滤纸上微小风干,保证凝聚物是固体且细胞元素不会散开在液体介质。

将样本包裹在薄纸中并放入包埋盒子和福尔马林容器中,而后在结构病理实习室中施行通例模范管教。

09

福尔马林或酒精蒸气法

行使福尔马林或酒精烟雾不变模范。该法子不需求额外的装备和试剂,材料是从细针抽吸中排出,在通用模范容器内部孕育小凝块,翻转盖子,将一张薄纸球推入容器底部,将约2ml福尔马林参预容器中并浸入薄纸中。假如行使酒精,则将两个异丙醇拭子安放容器的底部。

将容器置于室温并颠倒起码6小时,这时样本曾经被福尔马林或酒精蒸气不变并变为固体,参预福尔马林将其盖子取下以打垮模范和盖子之间的吸力。模范放入包埋盒中,一旦从盖子上取下,就需参预福尔马林,而后在结构病理实习室中施行通例模范管教。

10

用于细胞颗粒或结构碎片的细胞块技能—法子1

(行使百分比95酒精)。这类罕用的法子行使酒精离心样本,该模范已预先不变于酒精溶液中。

将50mL的患者样本倒入标识的试管中,寄存平分(若有须要)施行襄理测试,用不变剂(95%酒精)或熔解剂(譬喻CytoLyt)模范陆续离心10分钟(转/分钟)。倒出上清液完整震撼涡旋模范(断定能否需求)。

第二次离心以熔解血液量多或强硬/精细细胞颗粒模范。增加平分试样95%酒精与模范,调匀再次离心。完整倒出酒精。此时,依据细胞颗粒的巨细,择最符合的法子。假如是细胞蜡块颗粒特别小和/或堆积物很少或不能很好地包埋,则行使取代技能,如HistoGel或琼脂。行使刮刀从锥形管中掏出细胞积淀,宽度须合适,放入结构包埋盒中,于结构包埋盒底部放入海绵,固化卓越的细胞颗粒物没有须要行使太大的海绵。

将合适巨细的拭镜纸放在蓝色的海绵上,将细胞蜡块置于拭镜纸上,以包埋盒为重心,取第二张拭镜纸以45度角安放在细胞蜡块的顶部,再于第二张拭镜纸顶部安放第二块海绵,重心有一个孔,稳固地将包埋盒卡入到位,并将包埋盒放入福尔马林中,而后在结构病理实习室中施行通例模范管教。

图5.用于细胞颗粒或结构碎片的细胞块技能-法子1

11

用于细胞颗粒或结构碎片的细胞块技能—法子2

(行使生理盐水,RPMI或福尔马林搜集)。每每此法用于细胞蜡块制备(图5和6)。将模范转变到50mL锥形离心管中并做好标识,将离心术配置为rpm运转5分钟以赢得浓缩的细胞,倒出上清液,终了浓缩细胞成按钮状。模范或者没有粘性,除掉上清液会起头下落,假如产生这类情景可增加缓冲福尔马林以协助修理。该混杂物应静置30-60分钟以使其凝聚,而后用刮刀去除按钮状模范,直到摆脱管子。

将按钮状模范放在用中性缓冲福尔马林潮湿的结构薄纸上头,并放入结构包埋盒中。终了全数环节后,将包埋盒及其体例物放入缓冲的福尔马林中使其完整遮盖包埋盒。让模范不变起码30分钟或更永劫间,而后在病理实习室施行样本管教。假如细胞特别小和/或堆积物很少,不能很好地包装,请行使取代技能,譬喻HistoGel或琼脂。关于大的,固化卓越的细胞积淀,或者不需求海绵。

图6.用于细胞颗粒或结构碎片的细胞块技能-法子2

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