抗酒石酸酸性磷酸酶染色液
产品货号：R
产品包装：3×10ml
产品简介：
酸性磷酸酶(acidphosphatase，ACP)分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内。各种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的适宜pH为4.5～5.5。存在于正常人肺泡巨噬细胞和白血病人脾脏的抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistntacidphosphatase，TRAP)均在细胞滤泡中，并不是释放入血液。血液中的TRAP绝大多数来源于破骨细胞，因此可以通过测量血液中的TRAP了解破骨细胞的功能状态。
抗酒石酸酸性磷酸酶染色液以萘酚AS-BI为底物，在酸性pH下被酸性磷酸酶水解释放出磷酸和萘酚，萘酚与重氮盐偶联生成有色产物，定位于细胞质中，若细胞内的ACP有抗酒石酸的活性，则呈阳性反应。该染色液可用于新鲜血涂片、细胞涂片，亦可用于冰冻切片、石蜡切片。
产品组成：
自备材料：
1.蒸馏水、恒温箱
2.载玻片、推玻片
3.光学显微镜
操作步骤(仅供参考)：
(一)血液、细胞涂片：
1.推片：取新鲜血液或骨髓涂片置于载坡片上，推玻片于载玻片保持30度，置于血液或细胞滴液的正前方，稍往后移不血液或细胞滴液接触使后者沿推片下缘散开，再匀速沿载玻片平面平稳向前滑动至铺满血膜为止。
2.自然晾干，TRAP固定液4℃固定30s～3min，多数情况下30～60s即可。
3.水洗，稍微晾干(不易过分干燥)。
4.切片入TRAP孵育液，置于37℃温箱，避光浸染45～60min，水洗。
5.复染：Lea苏木素染色液染色5min或甲基绿染色液染色2～3min。
6.水洗、晾干、镜检。
(二)冰冻切片：
1.冰冻切片回温至37℃，水中浸泡1～2min。
2.自然晾干，TRAP固定液4℃固定1～3min。
3.水洗，稍微晾干(不易过分干燥)。
4.切片入TRAP孵育液，置于37℃温箱，避光浸染45～60min，水洗。
5.复染：苏木素染色液染色5～8min或甲基绿染色液染色2～3min。
6.水洗、晾干、镜检。
(三)石蜡切片：
1.石蜡切片脱蜡5～10min，重复一次。
2.无水乙醇5min，90%乙醇和70%乙醇各2min。
3.水洗2min。
4.自然晾干，TRAP固定液4℃固定30s～3min，多数情况下30～60s即可。
5.水洗，稍微晾干(不易过分干燥)。
6.切片入TRAP孵育液，置于37℃温箱，浸染45～60min，水洗。
7.复染：Lea苏木素染色液染色5～8min或甲基绿染色液染色2～3min。
8.水洗、晾干、镜检。
染色结果：
阳性颗粒紫红色
细胞核蓝色(苏木素)或绿色(甲基绿)
临床意义：
1.毛细胞白血病的毛细胞ACP染色呈强阳性或中度阳性，且不被酒石酸抑制，其他细胞均呈阴性或极弱阳性。
2.急性白血病幼单核细胞ACP染色呈阳性，原淋巴细胞呈弱阳性，原粒细胞对ACP反应不一。
3.T淋巴细胞ACP染色呈阳性，颗粒粗大、分布密集。B淋巴细胞呈阴性或颗粒细小的弱阳性。
4.戈谢细胞呈强阳性，尼曼-皮克细胞呈阴性或弱阳性。
注意事项：
1.TRAP孵育液易失效，本法宜用皮肤穿刺血涂片，晾干后应及时染色。
2.对冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。
3.样本需新鲜，取材后应立即处理，否则会影响酶的活性。
4.组织固定需在4℃冰箱进行，时间不宜超过24h，否则酶活性会减弱或消失。
5.组织在石蜡包埋时，温度不宜高于56℃。应使用熔点为52～54℃的石蜡进行浸蜡，浸蜡时间要短，否则酶活性会减弱或消失。
6.不纯的二甲苯会分解黑色沉淀，宜选用AR级以上的二甲苯。
7.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
保存条件：
2-8℃避光，6个月有效。
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