“极臻品质,真实保障"
这句话,是臻石生物的创立之本,也是每一个臻石人的信仰和初心。千里之行,始于足下;臻石之品,成于匠心。我们将怀揣着对于品质的卓越追求,不断超越自我。
大家好:
大伙都知道,臻石生物最擅长做的事情之一,就是研发核酸免提取产品。半年时间,我们先后推出了几款性能优秀的样本释放剂产品往期回顾《RNA常温保存10天?这个可以有!》《数字PCR?扩增子测序?安排上!》,在国内外市场上均收到了不错的评价。同时,我们也在不断研发新产品,今天终于可以兑现之前立过的FLAG了。
老规矩,先上图:
石蜡包埋样本核酸释放剂
没错,石蜡包埋样本的核酸免提取,我们已经实现这个小目标了!
石蜡包埋样本核酸释放剂,适用于石蜡包埋样本的快速裂解与核酸释放。无需二甲苯脱蜡及核酸提取和纯化处理。石蜡包埋样本加入本产品后,仅需10分钟加热、震荡及离心后,直接释放DNA及RNA,操作者可直接抽取管内液体进行PCR、RT-PCR、QPCR、数字PCR以及扩增子测序等后续检测。
1.研发初衷?切片的情义说翻就翻!
当初为啥立下这个FLAG?做兄弟,在心中!
(真实情况是:再不给玩病理的兄弟做点配套产品出来,他们真的会吃饭睡觉打老王的)
而我就是老王……
老王没进IVD行业之前就是做病理的,神马石蜡包埋,组织切片,HE染色啥的,玩的也是虎虎生风。在臻石生物样本释放剂产品刚推出的第二天,老王接了老刀的电话(当年切片玩的比老王还溜,所以人送外号“老刀”)
老刀:听说你小子做了几个样本释放剂?还免提取?
老王:过奖啦,也是想为IVD事业做点贡献……
老刀:别吹,你咋不开发个石蜡切片的免提取产品?
老王:我……(其实老王是想说忒难了)
老刀:你忘了我们当年一起闻过的那瓶82年的二甲苯了吗?
老王眉头一皱,熟悉的味道仿佛又钻进了鼻腔。二甲苯这玩意,做病理的都离不开,组织透明和脱蜡都靠它,可毒性大会致癌不说,还贼难闻,重的时候那鬼气味儿能在鼻子里留上好几天。
老刀:就知道你小子没情义……咣当……
老王吓得虎躯一震,因为咣当那声是老刀合上切片机保险锁的声音。上次老刀像这样用力关上切片机之后,当场就把老王按在地上一顿摩擦。
不过今天老王算是安全了,因为老刀肯定中意这款产品。老王知道老刀喜欢石蜡切片,这么多年也一直在肿瘤基因诊断领域里奉献着青春。臻石生物的产品为检验一线的朋友们带来了不少便利,现在,也该为老刀这些天天在病理实验室默默耕耘的兄弟们做点事情了。
2.石蜡包埋样本又不是咽拭子,为啥也要测核酸?
这个以前就跟大伙提过,核酸检测不只针对新冠病毒,它严格来讲叫“分子诊断”,不光传染病检测用这类技术,肿瘤诊断领域用的也挺多。
而石蜡包埋样本是干啥用的呢?简单科普一下:
医院里医生的分工不同,有外科医生也有病理医师。外科医生大家都知道是动刀的,负责把病人身上的肿瘤给切掉,但是在手术台上外科医生可看不出来这肿瘤是良性的还是恶性的,因为人眼不是显微镜,真看不清。
那怎么办呢?切下来的肿瘤送病理科去。病理医生就把这肿瘤放中性甲醛里(就是福尔马林),然后按固定-脱水-透明-包埋这套标准程序,把这一坨肿瘤,变成石蜡包埋样本,切成透明的薄片(就几微米厚)贴玻璃片上,然后一染色,放显微镜下面一看,基本就知道这肿瘤是个啥了。
这也就是传统病理诊断流程,一直是肿瘤诊断的金标准。而最近几年,分子病理诊断发展的贼拉迅猛,科学家们想从分子层面,也就是基因层面上去研究肿瘤。而肿瘤一切的秘密,都藏在这小小的石蜡包埋样本里面。想知道这肿瘤在基因层面上出现什么突变了,就得把这石蜡里面的核酸(DNA和RNA)都给弄出来检测。
3.从石蜡包埋样本里提取核酸难吗?2个小时,你说呢?!
老王理解老刀火气为啥这么大,因为从这小石蜡块里面提取DNA和RNA,太难也太繁琐了。常规的操作步骤就下面酱婶儿的:
这一顿操作,没2个小时下不来。
为啥这么难呢?这石蜡包埋是解决了样本保存和镜下观察的问题,说白了就是用甲醛把蛋白质统统变性,把里面的水分通通整出来,然后这样本就可以穿着一身石蜡外衣,室温条件下保存个三五年都问题不大;石蜡包埋组织的切片是透明的,染色以后在显微镜下面很容易进行观察。
样本是安全了,观察也容易了,可里面的DNA和RNA想弄出来可就难了。为啥?全包在石蜡里面了!而且包进石蜡之前,还被甲醛、酒精和二甲苯好一通折腾,好些DNA和RNA都给整零碎了。提取核酸之前,先得把样本细胞内外的石蜡都给脱干净了,就还得用到二甲苯这倒霉玩意,又有毒又有味儿;把石蜡脱干净了,就得按上面那步骤来一遍,提取出来的DNA和RNA质量还不一定过关。
所以,老刀经常跟老王抱怨:2小时操作猛如虎,最后可能提了个寂寞……
4.只要10分钟!二甲苯脱蜡、核酸提取和纯化,统统地不要!
你们没看错,用臻石的产品来处理石蜡包埋样本,只需要10分钟,不用二甲苯,也不用常规核酸提取操作。
这些步骤,我们用10分钟的加热,震荡和离心给替代掉了。
当然,功能核心是产品强大的脱蜡和样本裂解作用,而且原材料均是无毒无公害的成分,操作步骤就下面酱紫的:
找个没开过封的手术刀片,把没染过色的病理切片(业内俗称“白片”)上面的组织都刮下来(5微米厚的白片,刮3张就够了),放进我们的产品里(如果是刚切下来的蜡带或者蜡卷就直接放管子里),拧紧盖子,90°加热10分钟,用涡旋振荡仪剧烈震荡一下,然后离心(确保管壁上没沾东西就行)。下面是流程图:
(还看不懂的都去面壁!画的这么灵魂还看不懂?)
然后呢,用移液器从管子里抽点儿液体,就可以当PCR模板去扩增了。不信?下面这图就是证据:
一句话:别的都是浮云,PCR能扩出来才是王道!
一如既往的简单粗暴,PCR,RT-PCR,QPCR,数字PCR,扩增子测序建库试剂,都能适配,随便你怎么招呼都行。
但是呢,DNA保存时间就没那么长了,这回也就能做到室温条件下保存7天;RNA就更短了,1个小时之内,必须上机做PCR。理由很简单,石蜡包埋样本的DNA本身质量就不大好,RNA就更不用说了。别做不出来结果,回头又怪老王。
最后来自老王温馨且专业的提示
在使用本产品的过程中,需要注意的地方主要有3点:
石蜡切片里的石蜡含量如果比较大的话,加热并冷却以后,可能会在管底产生絮状或片状沉淀。用移液器从里面吸液体的时候,注意别堵着枪头;
石蜡包埋样本在其制备的过程中,其碱基序列上会有较低概率出现胞嘧啶(C)脱氨基变为尿嘧啶(U)的现象,这会导致后续的PCR反应中出现CT或GA的转换,因此建议在PCR体系中加入UNG酶,以避免此类现象的出现;
90°加热10分钟以后,保存管的表面温度还是比较高滴,别猴儿急猴儿急地伸手就拿,然后还不戴手套,不烫你烫谁?总之,大家千万别跟老刀学……
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