病理切片的制备一般在牵涉到动物实验的课题中都会遇到，切片染色可在动物/细胞水平上分析实验结果。组织包埋可分为OCT包埋（冰冻切片）与石蜡包埋。冰冻切片一般厚度8~15μm。石蜡切片一般5μm左右。冰冻切片对于组织的抗原性保留比较好，但是形态保留比较差。石蜡刚好相反。今天这篇文章给大家介绍一下怎样制作病理切片蜡块，即组织的石蜡包埋。
一、实验材料
动物组织，4%多聚甲醛（PFA），PBS，蒸馏水/自来水，二甲苯，梯度乙醇，石蜡，石蜡包埋机。
二、实验步骤
1、取材：针对各组织部位规范化取新鲜组织，并用刀片单向切割成约3-5mmX3-5mmX10-20mm大小组织块
2、固定：将切好的组织块放入4%多聚甲醛中固定，以组织块与4%多聚甲醛体积比1：20为宜；对于一些大的组织器官（肝，肺等）可通过灌注用生理盐水替换血液后，继而灌注4%多聚甲醛初步固定后再进行1步骤。一般在4度固定12~24h，因组织而异。
3、洗去PFA：固定完毕后，用PBS洗3次，每次5分钟。
4、脱水透明：此步骤应根据不同组织设置合适时间，基本流程如下
75%乙醇——85%乙醇——95%乙醇1——95%乙醇2——无水乙醇1——无水乙醇2——二甲苯1——二甲苯2——二甲苯3
5、浸蜡：将石蜡融化，温度保持在57℃左右。一共需要过三遍蜡。因第一次组织含二甲苯过多，第一次浸蜡时间尽可能短约15分钟，后两次可适当延长至30min-1h。
6、包埋：将组织块放入盛有蜡液的模具中，所需组织切面与底部平行，因蜡液在冷环境中易凝固，此步尽量要快。
蜡液凝固虽然很快，但是刚凝固的蜡不好切，最好在四度冰箱放置过夜后再进行切片。蜡块可在4度储存很久。
三、注意事项
1、组织一定要新鲜，冻过的组织最好不要用来包埋，因为组织结构可能改变。
2、组织块可根据组织特性调整大小。
3、切组织块时刀片一定要锋利，并且单向切，防止损坏组织。
4、二甲苯可致癌，注意通风。
5、固定时如有血液等杂物，可用生理盐水清洗后再固定。
6.不同组织脱水步骤有差别，不能一概而论。
预览时标签不可点收录于话题#个上一篇下一篇转载请注明：http://www.0431gb208.com/sjszjzl/264.html
