石蜡切片需要烤片而冰冻切片不需要,原理你知道吗?
(1)
我们做病理常规石蜡切片HE染色时,为了防止组织脱片而进行烤片。而冰冻切片不经过烤片却不容易脱片,为啥涅?
要回答这个问题,得先理解新鲜组织与固定脱水后的石蜡组织有何区别。
咱得问几个问题:
一块新鲜的组织与一块固定脱水后的组织,在性状上有什么差别涅?
新鲜的组织是软而具有粘性的;固定脱水后的组织是硬而没有粘性的,为啥涅?
甲醛固定的原理是啥涅?
未固定的组织与已固定的组织在分子构象上有啥差别涅?
想一想哈……
(2)
咱先从甲醛的固定原理谈起吧。
甲醛蒸汽的饱和水溶液俗称“福尔马林”,福尔马林溶液中甲醛浓度约为37~40%。病理科组织规范使用的固定液为10%中性缓冲福尔马林溶液(甲醛含量3.7~4%)。
甲醛属于交联型固定液,甲醛分子先与水分子反应形成亚甲基乙二醇(偕二醇),亚甲基乙二醇再与蛋白质分子氨基端的氨基、侧链上的氨基与巯基形成交联反应,形成亚甲基桥联和N-取代亚胺类化合物,进而影响蛋白质分子相邻肽链的键能与键角改变蛋白质分子构象改变,引起蛋白质的变性与沉淀,最终起到固定作用。
固定前,蛋白质、脂类、核酸等大分子的分子构象是弹性可变的,所以组织是软而粘的。
固定之后,因为甲醛分子与蛋白质分子形成侧链交联,使蛋白质的空间三维构象失去可变性,大分子是“立”起来的。
有机大分子之间的力决定于两个因素:氢键的数量、不同氢键(N氢键或O氢键)的吸引力。
新鲜组织的蛋白质中的分子键键角是可以改变的,贴在载玻片上如同一个软和的糯米团,是“趴住的”,组织大分子与载玻片的二氧化硅亲密接触,形成的氢键多。
石蜡切片的组织因为固定之后,如同一个硬了的糯米团,在玻片上是“立着的”,因为石蜡的阻碍,未烤片的组织不能黏在玻片上的。经过烤片后,尽管大分子依旧是“立着的”,但烤片促进了组织大分子的原子能与二氧化硅形成氢键,使组织与载玻片粘连,但形成的氢键的数量上要远远少于新鲜组织。
所以呢,新鲜组织冰冻切片因为组织与载玻片形成大量的氢键连接,不需要烤片也不容易脱片。石蜡组织需要通过烤片才能促使组织与载玻片形成氢键连接,烤片温度和时间都需要保证才能达到不脱片的目的。
(3)
呵呵.......是不是觉得挺复杂?
我们是不是也遇到过组织脱片的现象呢?从组织与载玻片粘连的原理来思考问题,会更加容易的找到解决之道。
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