病理组织学
国际著名病理学家KarlLennert曾经说过：“技术是病理学之母”。病理组织学属于形态学检验，组织病理学是将病变组织制成厚约数微米的切片，经不同方法染色后用显微镜观察其细微病变，对疾病做出病理学诊断。组织病理分析是检验大多数动物模型实验成功与否的金标准。病理学基本检验技术包括组织固定、石蜡制片、苏木素-伊红染色及常用特殊染色技术。
“操千曲而后晓声，观千剑而后识器”，阅读下文自测病理组织学知识你知多少~
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一、石蜡切片与冰冻切片
（一）石蜡切片制备流程
1
取材、固定
2
洗涤、脱水、透明、浸蜡、包埋
3
切片、捞片、晾片
4
染色、封片
（二）冰冻切片制备流程
1取材、固定
2OCT包埋
3液氮速冻
4切片、染色
TIPS：石蜡切片和冰冻切片如何选择?
1、冰冻切片优点制片时间短，时间快；缺点保存时间短；
2、石蜡切片对组织的形态保存比冰冻切片好,标本可以长期保存；
3、常规染色，组化优先推荐做石蜡切片；
4、免疫荧光推荐用冰冻切片(石蜡有自发荧光)；
5、脂质染色、ROS染色、ATP染色，胆固醇染色推荐做冰冻切片。
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二、HE染色
苏木精—伊红染色法(hematoxylin-eosinstaining)，简称HE染色法，石蜡切片技术里常用的染色法之一。HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。
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图注：拓普生物HE染色图
1
组织固定
2
包埋
3
脱蜡
4
苏木素染色
5
伊红染色
6
脱水
7
封片
8
观察拍片
9
结果整理
图注：HE染色实验流程图
HE染色过程可能出现问题：
1、HE染色最常见的红蓝失调
偏蓝色：苏木素染色过深，分化不够；伊红试剂过期；伊红染色时间太短，分化过度。
偏红色：苏木素染色过浅，分化过度；组织固定不佳，细胞核不着色；脱蜡不彻底，苏木素染不上；苏木素氧化成熟不够；伊红染色过深，分化不足。
2、HE染色后出现的大白色斑块或斑点
答：脱蜡前烤片温度偏低，时间过短，蜡未完全融化；切片在脱蜡溶剂中停留时间过短；脱蜡溶剂使用太久，得更新。
3、细胞核染色过浅，颜色暗淡
答：切片在苏木素染液中停留过短，或苏木素过度氧化失效，或分化时间太长。对策：重新染色。将组织切片放入0.01%氢氧化钠、0.5%氨水、饱和的碳酸氢钠溶液、乙醇溶液，每个3-5min即可，接着重新染色。可以适当地组织的嗜碱性以增强核染色，如Zenker液固定的切片可放入5%碳酸氢钠溶液中3h，自来水冲洗5-10min染色，或Bouin液固定的切片可放入5%碳酸氢钠溶液中1h，自来水冲洗10min染色。
4、细胞核染色过深，胞浆着蓝色
答：切片在苏木素染液中停留过长；或切片太厚；或分化时间太短。这种情况首先镜下看看切片厚度(最佳厚度1-2层细胞核)，要么重新染色，要么重新制片。
5、细胞核呈棕红色改变
答：苏木素染液过度氧化；或苏木素染色后反蓝不足导致。应该立即更换苏木素染色液。或在流动自来水(一般自来水PH7.5-7.8)，或在稀释的氨水溶液，或在0.2%碳酸氢钠中适当浸泡，这些步骤均可一定程度地加强苏木素染色后的反蓝效果。
6、伊红染色较淡
答：伊红的PH改变了(PH可能已大于5)；或反蓝液体未漂洗干净，残留后影响胞浆嗜酸性染色；或者切片太薄并且在随后的脱水步骤停留过久。对策：检查伊红染色液PH，可采用乙酸调至4.6-5.0。根据以上提示，调整实验步骤。
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三、免疫组化
免疫组化是应用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术。
图注：拓普生物免疫组化图
1
组织固定
2
包埋
3
脱蜡
4
抗原修复
5
封闭
6
一抗孵育
7
二抗孵育
8
DAB显色
9
苏木素复染
10
观察拍照
11
封片
12
脱水透明
图注：免疫组化实验流程图
图注：拓普生物其他染色图
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四、各类组织常见染色方法及指标
组织类型
实验方法
具体检测项目名称
脑
常做特殊染色
常做组化荧光指标
TTC（脑梗），尼氏染色，甘安银染色，LFB染色，高尔基染色，刚果红染色，FJB染色
心脏
常做特殊染色
常做组化荧光指标
TTC（心梗），mason（心梗），天狼猩红（心梗）,冰切油红（动脉粥样硬化，主动脉瓣）
主动脉
常做特殊染色
常做组化荧光指标
EVG,大体油红，冰切油红，movant五色法
a-SMA，VWF,VIII,VEGF
肝
常做特殊染色
常做组化荧光指标
PAS染色，冰切油红，mason，天狼猩红
炎症：CD3,CD4,CD8,CD68,F4/80,MPO,Ly6G，CD11c，CD11b，IL2,IL4,IL6,IL8,IL10,TGFb，Tonfa；纤维化：Tonfa-SMA，FN,LN
肾
常做特殊染色
常做组化荧光指标
PAS染色，PASM染色,mason，天狼猩红
纤维化：Tonfa-SMA，FN,LN
肺
常做特殊染色
常做组化荧光指标
HE染色，PAS染色，mason，天狼猩红,Wiegert间苯二酚碱性品红染色
炎症：CD3,CD4,CD8,CD68,F4/80,MPO,Ly6G，CD11c，CD11b，IL2,IL4,IL6,IL8,IL10,TGFb，Tonfa；纤维化：Tonfa-SMA，FN,LN
胃
常做特殊染色
常做组化荧光指标
HE染色，PAS染色，阿利新蓝染色，AB-PAS染色，肥大细胞染色
c-kit，GLP-1，ZO-1，claudin，occluding
肠
常做特殊染色常做组化荧光指标
HE染色，PAS染色，阿利新蓝染色，AB-PAS染色，肥大细胞染色
c-kit，GLP-1，ZO-1，claudin，occluding
拓普生物病理组织学技术服务
拓普生物病理组织学技术服务是拓普生物六大技术服务平台之一，基于动物技术平台搭建而成，欢迎客户致电咨询，我们竭诚为您服务~
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