大家好，菌种既是重要的生物资源，又是黄伞生产的关键环节。一个优良菌株被选育出来以后，必须保持其优良性状，防止退化及杂菌污染。今天小编带大家了解黄伞菌种的保藏方法。
1.倾斜表面低温保存方法的低温保存方法，也称为定期移植保存方法，是目前最常用的简单保存方法。
具体的操作方法：将棉塞管用硫酸纸包裹，然后将几根管用牛皮纸包裹，并在4°C的冰箱中存放。为了防止在保存过程中过多的酸积累，在制备用于保存细菌的培养基时，应添加少量的缓冲盐，例如添加0.2％的磷酸二氢钾或0.02％的碳酸钙。物质。另外，为了减少保存过程中培养基中水的蒸发，可以将琼脂含量适当地增加至2.5％（琼脂具有保水功能），或者在准备保存时可以使用喷嘴蜡封介质。
在生产中，最好将倾斜的冷冻保存方法与其他保存方法结合起来以减少循环器的数量。当第一位母亲被隔离或被选中时，尝试尽可能转移一些坡度，一些用于第一次生产，另外3到5个用于矿物质保存（或冷冻干燥，液氮冷冻保存），其余的将用作母亲该种用于下一批生产，暂时储存在4℃的低温下。冷冻保存的菌株用完后（或保存期后），将其从第一代矿物油保存的菌株中移出，这样每批中使用的菌株可以保留在前几代中。在水平方向上，保持菌株的优良特性是有益的。
2.液体石蜡的保存方法液体石蜡的保存方法是将液体石蜡注入要保存的菌株的试管中，以减少氧气的供应，防止水的蒸发，抑制细胞的新陈代谢，达到延长保存时间的目的。液体石蜡，也称为矿物油，也称为矿物油保存方法。通常，细菌可以保存3年以上，但是最好每1-2年转移一次。使用前请丢弃，将其分配在锥形瓶中，放入1/3的瓶子（毫升三角瓶中加毫升液体石蜡）中，用棉塞包好，并在0.MPa的压力下灭菌。一小时后，将其灭菌并置于40℃的培养箱中以蒸发水直至石蜡液体透明。
使用矿物油防腐剂时，无需倒入矿物油。只需使用接种工具从倾斜的表面上拾取一小块菌丝，然后用无菌水清洗，然后将其转移到倾斜的培养基中即可。剩余的亲本物种可以继续保存。该方法的缺点是应变必须是垂直的，占据很多地方，并且运输不便。
3.真空冷冻干燥保存方法真空冷冻干燥保存方法，称为冷冻干燥方法，是菌株保存的理想方法。该方法利用真空，干燥和低温使该物种的生命活动处于休眠状态。该方法变化少，保存期长（可保存10至20年），运输和保存方便，不会受到细菌和螨虫的有害影响。但是，缺点是安瓿瓶只能使用一次，而只有孢子不能保存。
冷冻干燥保存的基本方法是将要保存的孢子制成悬浮液，放入专用的安平瓶中，然后突然冷冻，立即抽真空，使培养菌升华并脱水。以固体形式，将溶液在低温下冷却。或保存在室温下。具体操作步骤如下。（1）安瓿瓶的准备：取直径8毫米，长度不少于毫米的中性玻璃安瓿瓶。首先将安瓿浸泡在2％的盐酸中，然后用自来水洗涤3次，最后用蒸馏水洗涤并烘烤。实际上，每个瓶子上的细菌和日期标签（适合10毫米×30毫米）瓶壁，瓶口均填充有棉花，并在灭菌后使用。
（2）保护剂的制备：保护剂的作用是保护细胞在冻干和保存过程中免受损害和死亡。该保护剂通常用于脱脂牛奶。准备时，请注意浓度和pH值以及灭菌方法。
（3）菌株的制备和分配：使用接种工具将待保存的孢子连接到装有2至3mm无菌脱脂奶的试管中，并稍加搅拌以制备悬浮液，将其立即分配并尽可能冻干。分配时，使用长毛细管滴管将孢子悬浮液直接滴入安瓿瓶的底部。注意不要溅到瓶的上壁，并且每瓶分配0..2ml。
（4）预冷冻：在冷冻干燥操作之前，要进行预冷冻以防止大量的泡沫在抽真空初期溢出，并且预冷冻温度为-40至-30°C。
（5）冷冻干燥：将预冷冻的安瓿置于干燥箱中进行真空干燥。干燥箱的温度应控制在-30°C以下，并且应尽快将真空度降至0.kPa或更低。最好逐渐达到0.至0.kPa。之后，可以适当升高温度以加速水的升华，但必须小心。太高而不会引起熔化。干燥时间约为8小时。关键是要控制适当的残留水分。通常，水含量为1％至3％时，保存效果最佳。
（6）真空密封：将细菌安瓿真空干燥后，应立即安装在吸管上，再用真空橡胶管密封。密封时，必须保持真空，并且在泵送时将安瓿瓶的瓶颈密封。密封保险丝时，火焰不应过大，以免在燃烧瓶口时烫伤细菌。密封后，有必要检查普通电子真空枪的真空度，瓶中的灰蓝色灯合格。使用保存的菌株时，应进行复苏培养。首先，打开安瓿瓶，加入0.30.5ml无菌生理盐水或1％麦芽汁。向安瓿瓶中添加生理盐水后，保存的细菌会溶解并摇动。然后将悬浮液添加到相应的培养基中进行复苏培养。今天的分享就到这里了，欢迎大家在评论区留言。
转载请注明：http://www.0431gb208.com/sjslczl/6717.html
