石蜡切片VS冰冻切片
免疫组织化学简称免疫组化，原理是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使用标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对抗原进行定位、定性及定量研究。免疫组化常用切片主要包括石蜡切片和冰冻切片两种。今天，带大家一起了解一下石蜡切片与冰冻切片。
石蜡切片
石蜡切片是组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法，其不仅是观察正常细胞组织的形态结构，同时也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法。此外石蜡切片也被相当广泛地用于其他学科领域的研究中。
石蜡切片制作步骤
#1
固定：用10%福尔马林等固定标本，时间一般为6～12h。
脱水透明：由有浓度梯度的酒精作为脱水剂，脱去水分。再将组织块置于置于透明剂中透明，以替换出组织块中的酒精。
#2
#3
浸蜡包埋：将已透明的组织块置于已熔化的石蜡中，放入熔蜡箱保温。石蜡完全浸入组织块后进行包埋：将已浸透石蜡的组织块放入已熔化的石蜡中。冷却凝固成块即可。
切片与烤片：将包埋好的蜡块固定于切片机上，切成薄片，一般为5μm厚，放入加热好的摊片机中摊平后贴到载玻片上，恒温箱烘干时间与温度根据所处理的对象略有差异。
#4
#5
脱蜡:用二甲苯脱去切片中的石蜡，再经不同浓度梯度酒精处理后放入蒸馏水中浸泡15min。
染色:染色时应根据观察要求和研究内容采用不同的染色剂和染色方法，同时还要注意选用适宜的固定剂。经典的HE染色法是组织学标本及病理切片标本的常规染色。若对标本进行免疫组化染色需先进行抗原修复。
#6
#7
脱水透明：染色后的切片应先使用纯酒精脱水，再使用二甲苯透明。
封片：在透明后的切片边缘滴加中性树胶，后盖盖玻片，避免在操作过程中产生气泡。
#8
冰冻切片
冰冻切片是种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，随后进行切片的方法，其病理诊断对手术治疗具有着重大帮助和指导意义。
冰冻切片种类较多，有低温恒冷箱冰冻切片法，二氧化碳冰冻切片法，甲醇循环制冷冰冻切片法等。
冷冻切片制作步骤
#1
取材：一般取材不能太厚，理想厚度为1～2mm，不超过3mm，通常取具有代表性的组织。
包埋：冰冻载物台上先加入少量OCT（冰冻包埋剂），然后放入组织，将组织完全置入OCT内。
#2
#3
冰冻：建议根据组织性质、大小、厚度与机器温度来确定冰冻时间。一般当OCT最表面发白或者组织表面凝固后可进行修片。
切片：一般厚度为6～8μm，在修片时应调整好角度，尽可能切除病灶的最大面。
#4
#5
固定：及时将切好的切片放入冰冻固定液中固定。
染色与封片：充分固定好标本后进行染色处理。
#6
注：
HE染色步骤:按照苏木素（1min）→流水冲法（3min）→伊红染液（30s）→流水冲选（1s）→85%乙醇→95%乙醇（10s）→两次%乙醇（每次1～2min）→两次二甲苯（每次1～2min）。
石蜡切片和冷冻切片对比
石蜡切片和冰冻切片是最常见的两种切片方法。两者各有优缺点，在实验的应用上也有所不同。
#1
从应用对象上看，石蜡切片广泛应用于常规制片中，而冰冻切片则应用于手术中的快速病理诊断。
从包埋液上看，石蜡切片使用的是石蜡，而冰冻切片使用的是OCT。
#2
#3
石蜡切片的优点在于持久保存、细胞定位准确、可以使组织细胞形态结构保存完好、可放在室温条件下保存，可进行多种染料染色，细胞层次感好；而冰冻切片的优点在于不破坏其抗原性，基本不需要热修复，制片过程更快捷、简便防止掉片。
石蜡切片的缺点在于抗原丢失现象较常见，修复效果不理想，且高温、高压、煮沸过程脱片现象常见；冷冰切片则是保存时间较短、不易做连续切片，切取的组织也不能过大。
#4
文案｜王海婷
排版｜王海婷
终审｜满力瑜
长按
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