来源：ChemicalBook
背景[1-3]
大鼠解偶联蛋白1(UCP1)ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠解偶联蛋白1(UCP1)水平。
实验原理：用纯化的大鼠解偶联蛋白1(UCP1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入解偶联蛋白1(UCP1)，再与HRP标记的解偶联蛋白1(UCP1)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的解偶联蛋白1(UCP1)呈正相关。用酶标仪在nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠解偶联蛋白1(UCP1)的浓度。
大鼠解偶联蛋白1(UCP1)ELISA试剂盒
样本处理及要求：
1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（-转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（-转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（-转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
实验步骤：
1.从室温平衡60min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；3.待测样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；
4.随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL，15min内，在nm波长处测定各孔的OD值。
应用[4][5]
用于大鼠白色和棕色脂肪间充质干细胞的成脂分化趋向研究
比较大鼠腹股沟区WAT和肩胛间区BAT的结构及组成的差异,探讨白色脂肪间充质干细胞（whiteadipose-derivedmesenchymalstemcells,WADMSCs）和棕色脂肪间充质干细胞（brownadipose-derivedmesenchymalstemcells,BADMSCs）的形态学差异及成脂分化特性的差异。
方法1.体外分离腹股沟区WAT和肩胛间区BAT,大体形态观察两种脂肪组织之间的差别,石蜡切片,HE染色观察两者的组织学差异,透射电镜观察两者的超微结构差异。
2.石蜡包埋切片,利用解偶联蛋白1（uncouplingprotein1,UCP1）免疫组织化学染色比较两种脂肪组织差异。
3.酶消化法体外分离培养腹股沟WADMSCs和肩胛间区BADMSCs,比较两种脂肪间充质干细胞的形态学差异,并利用UCP1免疫荧光技术对两种脂肪间充质干细胞进行鉴定。
4.对所得的第3代间充质干细胞进行成脂诱导,利用油红O染色检测两种间充质干细胞的成脂诱导率并行统计学分析,利用免疫荧光技术检测成脂诱导、分化后的细胞是棕色脂肪还是白色脂肪细胞。
5.DAPI标记两种脂肪间充质干细胞后移植至大鼠腹股沟区,分别在1w、2w、3w取移植区域的脂肪组织,OCT包埋后切片,利用UCP1免疫荧光技术检测植入细胞的分化趋向。
结果1.大体观腹股沟区WAT呈亮白色,肩胛间区BAT呈棕褐色。HE染色显示腹股沟区WAT内的细胞多为空泡型且体积较大;肩胛间区BAT内的细胞多为小而分散的脂滴,细胞较小,其间也分布少量单房脂肪细胞。透射电镜显示WAT细胞器较少,BAT含有丰富的线粒体。
2.免疫组化显示WAT不表达UCP1,BAT大量表达UCP1。
3.BADMSCs胞体明显比WADMSCs透亮,且细胞突起更加细长。两种3代细胞均表达CD73、CD90、CD等间充质干细胞标记物。
4.WADMSCs的成脂诱导率为0.±0.,BADMSCs的成脂诱导率为0.±0.,两种间充质干细胞的成脂诱导率无统计学意义（P0.05）。成脂诱导后的细胞均表达棕色脂肪的特异性标记物UCP1。
5.两种间充质干细胞分别植入大鼠腹股沟区后,在1w、2w、3w发现,两种间充质干细胞在体内微环境的诱导下均表达棕色脂肪特异性蛋白UCP1。#试剂盒#
参考文献
[1]PPARαagonistelicitsmetabolicallyactivebrownadipocytesandweightlossindietinducedobesemice[J].TamirisLimaRachid,AlinePennadeCarvalho,IsabeleBringhenti,MarciaBarbosaAguila,CarlosAlbertoMandarimdeLacerda,VanessaSouzaMello.CellBiochemFunct.(4)
[2]ANewErainBrownAdiposeTissueBiology:MolecularControlofBrownFatDevelopmentandEnergyHomeostasis[J].ShingoKajimura,MasayukiSaito.AnnualReviewofPhysiology.
[3]Thedevelopmentaltransitionofovineadiposetissuethroughearlylife[J].M.Pope,H.Budge,M.E.Symonds.ActaPhysiol.(1)
[4]Coldexposure-anapproachtoincreasingenergyexpenditureinhumans[J].WoutervanMarkenLichtenbelt,BorisKingma,AnoukvanderLans,LisjeSchellen.TrendsinEndocrinologyMetabolism.
[5]牛艳菲.大鼠白色和棕色脂肪间充质干细胞的成脂分化趋向[D].新乡医学院,.
转载请注明：http://www.0431gb208.com/sjslczl/1399.html
