制备高质量的病理切片需要长期的经验累积和技术提炼。
在此，里来为您分享石蜡切片的制备优化指南，让您更加熟悉石蜡切片的制备，积累丰富的经验以及必要的制片优化技巧。
样本的前期处理
解剖时取材：
从大体标本上按照病理检查的目的和要求切取适当大小的组织块，供制片进行显微镜检查，即为取材。为达到诊断的目的，取得合适的组织是关键。这不仅要求材料要尽可能新鲜，更要有一定的数量和良好的质量。
1.活检组织标本在手术切下后1min内放入10%中性甲醛固定，尸检标本应争取在死亡后尽可能短的时间内取材；
2.通常选择正常与病变交界处组织，既包括病变本身及病变周围组织。主要是根据客户的要求；
3.所选组织应包括脏器全部层次结构或重要结构，如肾应包括皮质、髓质和肾盂；
4.体积大和分叶的器官，应视不同组织选取多个部位，如肝、肺等，没有特殊要求可分成小块，保证固定效果，小器官可整体取材并固定，如淋巴结、扁桃体、甲状腺等；
5.胃肠标本应将内容物冲洗掉，以免内容物影响组织固定，产生自溶。内容物也会影响切片质量，极易产生刀痕印；
6.所取材料应尽量保持肉眼标本的完整性，不宜过厚或过薄，一般厚约3~5mm，大小为1.5~2cm。
7.切取组织时不要挤压，应使用锋利刀具，少用剪刀，勿选用被器械钳压过的部位。
8.标本取材要熟练，尽可能快地完成整个过程，特别是易自溶的组织，如肠道、脑、腺体等。
大型长毒解剖固定液选择的注意事项：
1.一般常规动物组织固定选择10％中性甲醛。
2.多聚甲醛（4%）使用频率较少，因为对比中性甲醛，组织固定过后组织偏软，脱水后制片效果较差。
3.部分特殊组织，如：眼球、睾丸等可以选用对应特殊固定液，固定效果好。
固定的注意事项：
1.组织固定越新鲜越好。组织一经离体，就能及时地固定，这是最理想的情况。（固定最好在组织离体后30秒至1分钟）
2.组织固定，组织块不宜过大，否则固定穿透力不够强，浸透度不够快。如果组织较大、厚，极易发生组织自溶。因此，对于较大的组织，必须先进行处理，切成制片材料再行固定，这是最佳的处理方法。
3.固定液的量要充分。固定液的量与组织的比应10:1~20:1
4.组织的第二次固定或后固定。在常规病理活检组织中，往往只用一种固定液。但对于某些特殊病例是不够的，必须使用特殊的固定液再次将组织固定或在切片后染色前再行固定。这种方法称为二次固定或后固定。
样本的保存和转运
常规固定液固定的病理组织，组织与固定液比例1:10~1:20（大组织剖开固定），常温保存，环境阴凉，避免暴晒、潮湿；
固定瓶正置，密闭，切记不能漏液，组织在固定液中完全浸泡
冰冻样本采用干冰或液氮运输，干冰运输注意把样本放入干冰中，干冰表面温度不够低，时间长了后容易自溶。
样本固定后取材
1.取材工具：取材刀具必须锋利。切取标本不应该挤压和揉擦，不应使用有钩镊子或血管钳等手术器械镊取标本，以免损害组织造成人为组织变化，给诊断带来困难或导致错诊，漏诊。
2.标本的选取：选取病变与正常组织交界处。切取组织一般为2~3mm厚度的片状大小。
3.取下的组织块应尽量防止其弯曲扭转，如胃肠等组织。
4.如样本内部未固定好，应尽量选取固定较好的位置。
5.部分样本在前期解剖时未取到需要位置，应及时反馈，选取靠近需求位置的部分。
取材组织脱水
全自动脱水机进行脱水，根据不同组织和组织大小设定不同的时间脱水过程：酒精梯度脱水，二甲苯透明，石蜡浸泡填充组织。
组织包埋
包埋（embedding）就是将某些特殊的支持物质浸入到组织块内部，利用支持物质的物理特性，如由液态转变成固态，使整个组织具有均匀一致的固态结构和足够的硬度，以利于用切片机制取极薄的切片。
利用石蜡（paraffin）作为包埋剂，将浸过蜡的组织块置于石蜡内制成蜡块，是组织学切片技术中最常用的一种包埋方法。
组织包埋切片
用切片机切成一定厚度的薄片，粘贴在载玻片上，便于后期染色，目前切片厚度为1-2μm，组化、tunel、白片都为打胶片。
HE染色结果影响因素
1、组织固定时间和固定液比例
取下组织，及时固定。一般使用10%中性甲醛进行固定，组织与固定液比例1:10～1：20，固定最佳时间在3天-2周，若固定时间不足，固定液未完全渗透组织，镜下组织结构形态不完整，组织碎裂，细胞核染色不清楚，灰淡色；若固定时间过长，福尔马林会产生一种酸，细胞核深染，另外，长时间的固定往往会出现福尔马林色素，也会降低抗原的活性。
2、组织脱水时间
组织脱水时间需根据组织种属、取材大小而确定。组织脱水时间不足，组织掉片；脱水时间过长，组织脆裂，切片出现裂纹。
3、切片质量
（1）切片厚度：普通组织厚度1-2微米，特殊组织如脂肪组织、植物和特殊染色组织等切片厚度6-8微米。厚度偏薄，染色较淡；偏厚，染色过深，细胞形态不易于区分。
（2）切片无刀痕。
4、脱水时间不足，切片上有水珠
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