甲醛固定石蜡包埋（FFPE）能够保存组织样本多年，其样本适用于对临床资料进行回顾性研究，已逐渐成为分子生物学研究的重要材料来源。
虽然从新鲜样本中提取RNA的技术已经成熟，但是FFPE样本的局限性亦导致提取RNA存在难度。建立一种方法，可使从尘封多年不得以利用但却相较于新鲜组织具有更加丰富的临床病理信息和血液标本具有更加直观的诊断价值，以及细胞标本更加全面的研究意义的FFPE样本中提取RNA成为可能。
图1：FFPE样本及其应用；
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一、FFPERNA提取难点
FFPE样本RNA提取困难主要是这类样本离体后不能及时固定而面临着核酸酶降解的作用，当固定后又要遭受高热环境下的浸蜡包埋更促成RNA降解的发生，加之长期室温保存并与外界接触使得RNA降解普遍存在。基于以上原因似乎从FFPE样本中提取RNA不可能。
年Rupp等首次从蜡块中提取出RNA后人们发现，制作FFPE样本所使用的固定液可以使细胞中RNA与其它大分子物质，如蛋白质产生广泛交联形成网络，从而避免核酸酶的降解而保存，另一方面核酸酶在固定剂的作用下也在一定程度上甚至不可避免地发生变性而失活，这一本质的存在就是从FFPE样本中能够成功提取出RNA的基础。
图2：福尔马林固定对DNA、RNA和蛋白的影响
也因此，提取FFPE样本中的RNA存在以下难度：
1、核酸发生不同程度的降解；
2、分子间的交联；
3、提取的核酸得率低，完整性不高，质量较差，难以兼容下游qPCR、测序等应用。
二、凡知FFPERNA提纯解决方案
凡知对于FFPE样本中的RNA采用磁珠法提取，包括脱蜡、消化、96深孔板预装试剂、结合、洗涤Ⅰ、DNase处理、洗涤、洗脱等步骤，其中，基于FFPE样本的制作特性，提取的关键就是如何将RNA从与蛋白的交联中释放出来。
图3：凡知组织石蜡切片RNA提取试剂盒（磁珠法）提取流程图解
凡知医疗组织石蜡切片RNA提取试剂盒（磁珠法）采用蛋白酶K消化法，促进核酸和紧密交联的蛋白分开，释放核酸。向离心管中加入10μL的蛋白酶K溶液，涡旋震荡20s使其充分混匀，将离心管转移至恒温震荡混匀仪，56℃、rpm、60min。设置恒温震荡混匀仪或者金属浴参数，90℃、60min，然后瞬时离心收集管盖上液体后室温静置5min。
另外，针对长时间保存、RNA降解严重的石蜡样本，凡知医疗也可以有效提取RNA片段，并且质量较好，能满足下游qPCR、测序等实验要求，为下游基因表达谱检测提供丰富基因信息。凡知医疗组织石蜡切片RNA提取试剂盒（磁珠法）操作简单，效率高，可兼容市面上的主流高通量自动化核酸提取仪，搭配凡知32/96通道核酸提取仪效率更高，方便省时有效降低成本。
三、凡知FFPERNA磁珠法提取试剂盒简介
1、产品优势
RNA纯度高(OD/.8~2.0)；
高收率，无降解；
无高分子量DNA污染(DNaseI处理)；
专为FireAuto32/96自动化核酸提取仪优化；
良好兼容市场主流自动化核酸提取仪；
手工操作时间短；
使用安全，无二甲苯脱蜡；
2、RNA提取-核酸片段分析仪检测
石蜡包埋2天组织
石蜡块常温保存一年组织
3、高通量自动化FFPE提取解决方案
参考资料：
[1]朱萌,张宁,任牡丹,卢新兰,和水祥.从福尔马林固定-石蜡包埋样本中抽提RNA的方法与可行性[J].临床与实验病理学杂志,,29(03):-.DOI:10./j.cnki.cjcep..03..
[2]孙冰,郭晓红,江泽飞,张峰,吴世凯,张利利,王敦梅,宋三泰.乳腺癌冰冻和石蜡包埋样本的RNA以及基因表达情况的比较研究[J].临床肿瘤学杂志,,15(07):-.
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