免疫组化的原理说起来其实挺简单的，抗原抗体反应嘛，通过采用显色剂来标记抗体，进行化学反应后便能显色，从而确定出组织细胞中的抗原。可以进行定位、定性以及定量。
石蜡切片或者冰冻切片均可以做免疫组化的实验，前期的过程会有所不同：
石蜡切片：取出需要实验的石蜡切片，先进行脱蜡处理，最后置于自来水中备用。
对于冰冻切片，无需上述步骤，直接从-20℃冰箱中取出即可进行后续的操作啦~~~
接下来的步骤就全部一样啦~~~
抗原修复：由于我们在制备石蜡切片或者冰冻切片时，采用福尔马林进行固定，会使得组织中的许多氨基酸残基在分子内或分子间形成醛建，使得不少抗原决定簇被封闭；采用多聚甲醛会具有聚合作用，均阻碍了抗原和抗体的结合。所以我们怎么着都要进行这步哒，虽然比较耗时。言归正传，具体的抗原修复液为：
0.51g柠檬酸钠
0.g柠檬酸
双蒸水定容至mL
偷偷告诉你可以偷懒的，配置为10×抗原修复液后，每次实验稀释后使用就可以了。
配置好修复液后，将切片置于其中，采用微波修复法修复（中火，5min），取出后冷却至室温（一般放在4℃冰箱冷却更快），再进行如上微波修复后冷却，一共三次。
阻断内源性过氧化物酶：将切片置于3%过氧化氢（30%过氧化氢，采用甲醇稀释10倍即可得到）中10min即可。随后采用1×PBS洗三次，每次5min。抗原抗体反应步骤：这部分内容就会因使用的试剂盒的不同而略有差异了，我使用的是中杉金桥的二步法试剂盒，过程比较简单，接上一步骤后直接加一抗（1×PBS稀释）4℃孵育过夜。第二天洗一抗（1×PBS洗三次，每次5min）后加二抗室温孵育半小时后，同上洗三次。Tips:有些试剂盒会需要先用血清封闭后再加一抗孵育的。还有哦，孵育要在湿盒中哦，不然全挥发咯会。
DAB显色：这步挺关键的，显色的时间把握很重要，显色过度会颜色太深而观察不到有效的结果，时间过短也会显色不完全。建议采用计时器精确计时，并保证各组显色时间一致。很多实验结果不好跟这步没把握好有很大的关系。显色完成后采用自来水终止即可复染：苏木素复染，并采用盐酸酒精分化。采用逐步脱水的方式脱水，树脂封片。Tips:逐步脱水顺序80%乙醇----95%--95%--%中各30s左右，最后置于二甲苯中15min以上后即可封片。
小贴士方法步骤看似是不难的，但是结果往往差强人意。一步一步分析，经常会在多个环节发生问题，比如：一抗比例不够？组织样本的来源和你的试剂盒的匹配度不对？只做人源性样本的试剂盒拿来做了小鼠的。。。显色时间摸索不够，有些可能需要10分钟显示，而你做了5分钟就放弃了；中间的某个步骤忘记了？等等，这些都是容易犯错的地方，说到底还是老生常谈，仔细仔细仔细，用脑子用脑子用脑子。实在还是解决不了，来吧，找我，不谢。
最后煽情一下下，寒冬渐远，春意踏来，江南花事依旧，小荷婉转湖中。播种的季节，希望在科研的路上，小伙伴们也一路无愁。
阳春三月欢迎你~~freescience联盟更欢迎你~~~~
如何搜索别人的实验思路？
PCR实用技巧：七大方法消除引物二聚体
哪里去看经典的实验视频
为什么隔壁老王的细胞原代培养总是失败？
如何拟合Elisa标准曲线
ELISA常用方法+操作视频+常见问题问答
两个蛋白的爱情：GSTpull-down这件小事
PMAIonomycin为啥可用于流式检测？（活化细胞的机制）—实验小白
环状RNA定量PCR技术详解
Trizol提取真菌RNA的方法
荧光显微镜照片的merge方法
点这里领我们整理的软件库
点这里查看sci文章润色服务
freescience联盟
转载请注明：http://www.0431gb208.com/sjszlfa/756.html
