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如何提高组织切片水平

来源:石蜡 时间:2022/9/24

组织切片伴随着显微镜技术和免疫实验等的发展而得到广泛的应用,可进行组织的石蜡切片、冰冻切片,包括脱水、浸蜡、包埋,切片和染色而制成切片。组织切片制备的一般流程为:

1、取材活体取材的关键是尽可能地迅速和准确。整个取材过程最好在1分钟内完成并立即投入到固定液中,要注意材料体积要小,否则会影响固定效果。取材时所用的器械最好事先预冷,器械要锋利、操作时应避免拉、锯、压等动作而造成细胞损伤。

2、固定是电镜样品制备中极为重要的一环,其目的是利用化学试剂使被研究细胞的精细结构或化学成分保持其生前状态。良好的固定应使细胞的生命过程立即终止,其中所含的半流质内容物应立即凝固而不瓦解,所有的细胞器都应完整无损地得以保存下来。

3、浸蜡与包埋

浸蜡是将透明后的组织块置于刚过熔点的融化石蜡中浸渍,使石蜡逐渐渗入并完全置换出透明剂。

包埋是将浸蜡后的组织块置于盛有融化石蜡的模具中,并使之凝固成蜡块。

4、切片贴片

5、染色与固封

一般来讲,切片的操作要求在防震、恒温和无空气流通的环境中进行,因为轻微的震动、温度变化和气流等因素均会影响切片效果。

6、染色

为了增加超薄切片的反差,以充分显示组织和细胞的超微结构,一般采用铀·铅双重染色法。即先用醋酸铀对切片进行初染,再用柠檬酸铅进行复染。醋酸铀的主要作用是提高核酸、核蛋白和结缔组织纤维成分的反差;而柠檬酸铅主要是提高细胞膜系统和脂类的反差。

那么如何提高组织切片水平,应从以下几个维度着手

A待切样品的质量是关键因素,组织一定要新鲜,冻过的组织最好不要用来包埋,因为组织结构可能改变。如果进行短途运输,干冰比液氮更合适。组织块可根据组织特性调整大小。样品质量取决于前期处理工作的准确无误(包括固定、脱水、包埋)

B必须选择正确型号的切片机以及合适的钢刀或一次性刀片,切片时需认真考虑样品类型、大小、厚度,兼顾操作者的便利性和舒适性。

C切组织块时刀片一定要锋利,及时更换并且单方向切,防止损坏组织。

D固定时间依材料大小、固定剂种类而异,可从1小时到几时小时,有时中间需要更新固定剂。某些固定剂对组织的硬化作用较强,作用时间应严加控制,不能过长。

E操作者必须懂得切片机的工作原理,对机器进行精细调节以达最佳效;能应对常见故障,消除一些潜在的影响因素。

高质量的制片技术关键在于组织的固定、脱水、浸蜡与包埋等步骤,特别是组织固定,脱水,注重每个过程的细节,才能制作出合格的高质量的切片。

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