石蜡切片是组织学常规切片技术中最广泛使用的方法。石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构,也是病理学、法医学等学科研究、观察和判断细胞组织形态变化的主要方法,在许多其他学科中也得到了广泛应用。
现将实验室制作石蜡组织切片与展片操作过程中所要注意的细节分解如下:
切片:切片时,切片刀平面与组织切面间呈15°左右的夹角,使包埋块外切面与标本夹截面平行。
首先用10-15μm的修片厚度进行修片打薄,切到目标部位时停止。
打薄后将石蜡标本放入零下20度的冰箱半小时左右,此步骤是为了调整硬度,让蜡块更好切片。
冷冻完成后再次将石蜡标本固定在标本台上,调整至正常的修片厚度(3-5μm左右,根据自身组织进行调整)。
注意切片速度不宜太快,同时摇动转轮应均匀用力,防止切片机震动过猛,引起切片厚薄不均。
脱水:
将固定好的组织取出,去除多余的毛发、脂肪等杂质并修出一个平面,让组织放置更稳定。
将组织依次放入不同浓度的乙醇中脱水,从75%乙醇开始,依次放入75%、85%、95%无水乙醇脱水各60分钟,再依次放入两个%无水乙醇各30分钟。
透明:
将组织依次放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中,各6分钟。
浸蜡:
透明后将组织块依次放入:软蜡Ⅰ、软蜡Ⅱ、硬蜡。
软蜡Ⅰ、软蜡Ⅱ各30分钟。
硬蜡1小时。
包埋:
浸蜡完成后,将熔化蜡倒入包埋盒,迅速用温镊子夹取组织块,切面朝下放入盒的中央位置,待石蜡全部凝结变硬即可取出。
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