上一次推送文章（链接）提到过，免疫组织化学反应的组织准备在很大程度上决定了实验的成功与否。这篇文章详细介绍了5种组织准备的细节及方法。
载玻片
高质量的免疫组组化结果需要组织切片与载玻片之间很好地结合，以防止由于组织黏附问题导致的试剂聚集和假染色。商品化的专门用来进行免疫组织化学染色的载波片是经过标准化
包被的。这里将介绍两种方法对常规载波片包被以用于免疫组织化学染色。
1、聚左旋赖氨酸（poly-L-lysine)包被玻片法
(1）准备0.1%(w/V)聚左旋赖氨酸水溶液(SigmaP-）。
(2）将载玻片浸入溶液中。
(3）室温干燥。
(4）室温保存。
2APTS包被玻片法
准备含2%(V/V硅烷(SigmaA-)的丙酮溶液。将载玻片浸人丙酮中1～5min。将载玻片浸入含2%硅烷的丙酮溶液中1～5min。将载玻片在丙酮溶液中连续洗两次,每次5min。室温干燥并储存。
细胞涂片/离心细胞涂片制备
(1）在硅烷/聚左旋赖氨酸包被的载玻片制备细胞刮片/细胞离心涂片。
（2）室温下干燥30min。
(3）在预冷的、新鲜的丙酮中一20℃固定20min。
(4）室温下风干至少15min。
(5）对细胞刮片/细胞离心涂片染色。
注意
(1)%乙醇可代替新鲜丙酮使用；固定剂的选择取决于组织中要染色的目的抗原。
(2）未染色的载玻片可以包被在铝箔中,-20℃保存。当准备染色时:打开铝箔，取出载玻片并恢复至室温，用保存之前相同的固定剂进行后固定至少30s，风干切片，在缓冲液中再水化5min，然后进行染色。
(3）未染色载玻片的稳定性取决于抗原性质；一些抗原很不稳定必须涂片后立刻染色。
冰冻切片
(1)切4个7um厚的未固定的冰冻切片。
(2）将切片置于硅烷/聚左旋赖氨酸包被的载玻片上。
(3）将切片在空气中风干30min。
(4）置于预冷至4℃的新鲜丙酮中，固定20min。
(5）室温风干切片至少15min。
(6）将切片染色。
注意
(1）%乙醇可替代新鲜丙酮使用；固定剂的选择取决于组织中要染色的目的抗原。
(2）未染色的载玻片可以用铝箔包裹，-20℃保存。当准备染色时：打开铝箔，取出
载玻片并恢复至室温，用保存之前相同的固定剂进行后固定至少30s，风干切片，在缓冲
液中再水化5min，然后进行染色。
(3）未染色载玻片的稳定性取决于抗原性质,一些抗原很不稳定必须涂片后立刻染色。
石蜡切片
(1）将组织在10%甲醛(其他的固定剂也可能更合适)中固定12-48h。固定时间取决于组织厚度、温度及待检抗原的性质。
(2）石蜡包埋。
(3）切3～5um厚的切片。
(4）将切片置于硅烷/聚左旋赖氨酸包被的载玻片上，使用无黏附剂的水浴。
(5）沿切片边缘吸干水。
(6）将切片置于60℃烤箱中30～60min。
(7）脱蜡后,将切片染色。
注意事项
(1)对于富含脂肪的组织(如脑、乳腺)延长风干时间(如室温下过夜)可能增强组织切片的黏附。
(2)干燥温度超过60°C可能对某些抗原的检测产生不利影响或者增加背景染色。
(3)无论储存条件如何，延长石蜡切片的储存时间都可能降低某些抗原的免疫反应性。根据作者经验，雌激素受体、孕激素受体、细胞周期调节相关蛋白质(如Ki-67、PCNA、cyclinD1、bcl-6)、甲状腺转录因子-1抗原等容易降解，因此石蜡块的切片不适合长时间储存。
(4)如果存档的石蜡切片的染色出现不一致,应该用新鲜切片重复一次实验。
细胞块
这一步骤适用于由于组织块太小导致普通石蜡包埋变得困难，需要一种能形成所谓细胞块的试剂。以下是四种不同的细胞块制备法：
一、琼脂细胞块制备法:
(1）取底部沉淀样本20ml，转/分，离心5-10分钟。
(2）吸干上清液，离心沉渣用10%中性福尔马林固定1小时。
(3）吸干液体。
(4）滴加少许融化的琼脂，摇动试管使其充分混合，转/分，离心，5-10分钟。此时，琼脂已凝固。
(5）将琼脂块取出，切成大小合适的块状放入脱水盒，按常规制备蜡块。
二、蛋清细胞块制备法:
(1）取底部沉淀样本20ml，转/分，离心5-10分钟。
(2）加鸡蛋清lml，用扁平的竹签轻轻刮取试管底部的细胞，尽量使细胞成团悬浮于蛋清中，离心5min(转/min)。
(3）去除多余蛋清，沿管壁轻轻加入10%中性福尔马林固定液2ml。蛋清遇到福尔马林立即凝固使细胞成团块状，轻轻摇动，让细胞团块悬浮于固定液中固定，过夜，轻轻取出细胞团块，用包埋纸包好，放入脱水盒，按常规制备蜡块。
三、直接细胞块制备法（当细胞量较多时可使用）
(1）取底部沉淀样本20ml，转/分，离心5-10分钟。
(2）吸干上清液，轻轻沿管壁加入95%酒精，转/分，离心5分钟，静置1小时。
(3）用竹签轻轻将沉淀物取出，用包埋纸包好。
(4）放入脱水盒，10%中性福尔马林固定1小时，按常规制备蜡块。
四、戊二醛细胞块制备法:
(1）取底部沉淀样本20ml，转/分，离心5-10分钟。
(2）吸干上清液，加入3%戊二醛10ml，充分混合,转/分，离心5-10分钟。
(3）用竹签轻轻将沉淀物取出。
(4）放入脱水盒，10%中性福尔马林固定1小时，按常规制备蜡块。
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